本試劑盒用于無內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 的大量制備,，柱上去除內(nèi)毒素,，操作簡單。菌體經(jīng)改良的堿裂解處理,，質(zhì)?？蓮木w中釋放出來,，并特異,、高效地被離心柱硅膠膜吸附,。通過去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質(zhì),，最后得到高純度的無內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA,，所得質(zhì)粒可直接用于酶切,、轉(zhuǎn)化,、PCR、測序,、細胞轉(zhuǎn)染等分子生物學實驗,。
彩色無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取

EndoFree Plasmid Maxi Kit

彩色無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒

彩色無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取

目錄號：31115-10

產(chǎn)品內(nèi)容：

保存條件：

在室溫(15 ~ 25℃)干燥條件下，可保存 12 個月,。

RNase  A,，可常溫運輸,，-20℃保存。

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒用于無內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 的大量制備,，柱上去除內(nèi)毒素,，操作簡單。菌體經(jīng)改良的堿裂解處理,，質(zhì)?？蓮木w中釋放出來，并特異,、高效地被離心柱硅膠膜吸附,。通過去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質(zhì)，最后得到高純度的無內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA,，所得質(zhì)?？芍苯佑糜诿盖小⑥D(zhuǎn)化,、PCR,、測序、細胞轉(zhuǎn)染等分子生物學實驗,。

小質(zhì)粒（<10kb）,，拷貝數(shù)高，100ml 菌液通常能提到 500-1500ug 質(zhì)粒,；大質(zhì)粒（>10kb）,，拷貝數(shù)低，200ml 菌液通常能提到 200-600ug 質(zhì)粒,。

產(chǎn)品特點：

1. du特工藝配方清除內(nèi)毒素,，內(nèi)毒素含量極低（< 1 EU/ug DNA），細胞轉(zhuǎn)染效果ji佳,。

2. 得率高： 150 – 300 ml 菌液可提出多達 500– 2000 ug 的純凈質(zhì)粒,；

重要提示：

一、使用前檢查 Solution II 和 Solution N3 是否出現(xiàn)沉淀,，如有沉淀 37℃加熱溶解后再用,。

二、shou次使用前,，請先在 Buffer WB2 中加入無水乙醇（詳見瓶身標簽）,，混勻，并做好標記,。

三,、shou次使用請先將 RNase A 全部加到 Solution I 中，混勻，每次使用后置于 2 ~ 8℃保存,。

操作步驟：

1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 2.5 ml 的Buffer BL,，10,000 rpm 離心 2 min，棄收集管中濾液,，將吸附柱重新放回收集管中,。

2. 取 100 ~ 150 ml（最多 200 ml）過夜培養(yǎng)的菌液，室溫 10,000 rpm 離心 2 min,，棄上清,，收集菌體。

（注意： 如果菌液濃度高,，收集 100ml 的菌體即可,菌液濃度低,，收集 150-200ml 菌液。）

3. 加入 10 ml Solution I,，重懸菌體沉淀,，渦旋震蕩至che底懸浮，呈現(xiàn)出均勻渾濁的棕紅色,。

（注意：如有未che底懸浮的菌塊會影響裂解,，導致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低）

4. 加入 10 ml Solution II，顛倒混勻使菌體wan全裂解,，直到溶液變清亮,、粘稠的紫紅色。

（注意：不可 Votex 劇烈震蕩,，以免造成基因組 DNA 片段的污染,，所用時間不要超過 5 min，以免質(zhì)粒受到破壞,，如未wan全變得清亮,，可能是菌體太多，可增加 Solution II 的用量,，在后續(xù)的操作中 Solution N3 的用量也要相應增加）

5. 加入 10 ml Solution N3,，立即溫和顛倒混勻，可見紅黃相間的絮狀物產(chǎn)生,，繼續(xù)混勻直

到wan全變?yōu)辄S色,，靜置 2 min，然后室溫 10,000 rpm 離心 10 min,，小心取上清至新管,。

（注意：離心后在最上層可能會出現(xiàn)一層漂浮膜,，注意不要倒入吸附柱）

6. 加入 0.3 倍濾液體積的異丙醇,，上下顛倒混勻。分兩次（每次不超過 10 ml）轉(zhuǎn)入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000 rpm 離心 1 min,，質(zhì)粒被吸附在膜上,，棄濾液，直到所有混合溶液通過此吸附柱,。

7. 向吸附柱中加入 5 ml ToxinOut Buffer,，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液,。

8. 加入 10 ml Buffer WB2,，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液,。

（注意：Buffer WB2 為濃縮液,，按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋,，以防酒精揮發(fā)）

9. 加入 5 ml Buffer WB2,，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液,。

10. 將吸附柱放進收集管,，室溫 10,000 rpm 離心 5 min，甩干膜上殘留乙醇,。

11. 將吸附柱置于一個新的 50 ml 離心管（自備）中,，打開管蓋，室溫晾干 5 min,，以免殘留乙醇影響下游應用,。

12. 加入 1 ~ 2 ml 的洗脫液Buffer EB，室溫放置 2 min,，12,000 rpm 離心 2 min,，離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA。

（注意：事先在 65~70℃水浴中預熱洗脫緩沖液 EB,，可增加洗脫效率,；

如果需要較多量質(zhì)粒，可將得到的質(zhì)粒溶液重新加入吸附柱中,，重復收集 3 次,，可獲得最大洗脫率；如需使用去離子水洗脫,，可用 NaOH 調(diào)整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間,。

彩色無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒 核酸提取