福爾馬林固定或者石蠟包埋組織通過du特裂解液熱處理和蛋白酶K共同作用迅速裂解細(xì)胞釋放出基因組DNA,，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除,，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
固定包埋組織DNA快速提取試劑he 核酸提取

固定包埋組織DNA快速提取試劑盒（離心柱型）

固定包埋組織DNA快速提取試劑he 核酸提取

目錄號：40312

v 適用范圍：

適用于快速提取各種福爾馬林固定和石蠟包埋組織DNA

v 試劑盒組成,、儲存,、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果

儲存事項:

1. 結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用,。

2. 為避免降低活性、方便運(yùn)輸,，提供蛋白酶K為凍干粉狀,，收到后，可短暫離心后,，10mg/20mg加入0.5ml/1ml滅菌水溶解,，因為反復(fù)凍融可能會降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分裝凍存,，－20℃保存,。

3. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化,、pH值變化,，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。

v 產(chǎn)品介紹：

福爾馬林固定或者石蠟包埋組織通過du特裂解液熱處理和蛋白酶K共同作用迅速裂解細(xì)胞釋放出基因組DNA,，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,，抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。

v 產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜,，柱與柱之間吸附量差異極小,，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端,。

2. 不需要使用有毒的苯fen等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟,。

3. 快速,，簡捷，單個樣品操作一般可在30分鐘內(nèi)完成,。

多次柱漂洗確保高純度,，OD₂₆₀/OD₂₈₀典型的比值達(dá)1.7～1.9，長度可達(dá)30kb -50kb,，可直接用于PCR,，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。

v 注意事項：

1. 所有的離心步驟均在室溫完成,，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機(jī),，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。

2. 需要自備乙醇（需要準(zhǔn)備100%/80%/60%/40%不同濃度）或者二甲苯,。

3. 實驗前將需要的水浴先預(yù)熱到37℃?zhèn)溆谩?/span>

4. 結(jié)合液CB和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚,，眼睛和衣服,。若沾染皮膚、眼睛時,，要用大量清水或者生理鹽水沖洗,。

5. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切,、連接等反應(yīng),。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批pH大于7.5,， pH過低影響洗脫效率,。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存,，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl,，1mM EDTA，pH 8.0）,，但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng),，使用時可以適當(dāng)稀釋。

v 操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請先在漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇,，充分混勻,，加入后請及時在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇,，以免多次加入!

1. 將組織切片放入離心管子，浸泡在二甲苯中脫蠟約30分鐘（具體時間根據(jù)切片厚度調(diào)整）,。

2. 將切片依次放入100%乙醇/80%乙醇/60%乙醇/40%乙醇/去離子水,，每個液體中浸泡10秒鐘重新水化切片。

剛放入100%乙醇時,，應(yīng)該見到切片變白,。

3. 顯微鏡觀察下，用刀片切下擬提取DNA的目標(biāo)組織,，放入預(yù)先稱重的1.5ml離心管,。再次稱重，計算出切片組織重量,。

4. 在25-50mg組織中加入200μl裂解液FTL,再加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml),，立即混勻混勻后置37℃水浴過夜。

5. 再加入10μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml),，混勻后55℃水浴1-2小時,。

此步驟后，不應(yīng)該見到粗大的組織顆粒了,。

6. 加入200μl 結(jié)合液CB,，立刻渦旋振蕩20秒充分混勻后置70℃水浴10分鐘。

7. 冷卻后加入100μl 異丙醇,，立刻渦旋振蕩30秒充分混勻,，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。

8. 用1毫升的槍頭吸取混合物,，將混合物加入一個吸附柱AC中,，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心60秒，倒掉收集管中的廢液,。

如果有不溶組織物可能堵住槍頭,，可將槍頭在吸水紙上輕蹭去除不溶物；如果吸上來的混合物少則可以將槍頭和不溶物一起棄去,，該做法是為了去除不溶物,，以免堵塞離心柱。,。

9. 加入500μl抑制物去除液IR,，12,000rpm 離心30秒，棄廢液,。

10. 加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!）,，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液,。

11. 加入500μl漂洗液WB,，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液,。

12. 將吸附柱AC放回空收集管中,，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液,，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng),。

13. 取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中,，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB （洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好）,，室溫放置3-5分鐘，12,000rpm 離心1分鐘,。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘,。

洗脫體積越大,，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高,，可以適當(dāng)減少洗脫體積,，但是最小體積不應(yīng)少于50μl，體積過小降低DNA洗脫效率,，減少DNA產(chǎn)量,。

14. DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放,，可以放置在－20℃,。

v 附錄：另外一種脫蠟方式

1. 將目標(biāo)組織切片放入離心管，加入1ml 100%二甲苯,，渦旋振蕩10秒,。瞬間離心把組織全部浸入到二甲苯。

2. 50℃水浴3分鐘熔解石蠟,，20-25℃最高速離心2分鐘,，收集組織到管底。

3. 小心用移液器吸棄上清二甲苯,，注意不要吸到沉淀,。

4. 加入1ml無水乙醇，渦旋振蕩,，最高速離心2分鐘,，小心吸棄上清乙醇。

5. 加入1ml無水乙醇,，重復(fù)步驟6一遍,，盡可能吸棄所有乙醇,。

6. 室溫或者37℃ 晾干乙醇10分鐘或直到所有乙醇揮發(fā)干。

v 問題與解決方法：

 

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