本試劑盒采用特制的進口DNA吸附柱和du特的緩沖液系統(tǒng),，特別適合于從口腔/yan拭子中分離純化基因組DNA,。各種來源樣品裂解消化處理后DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜（特別配備了Acryl Carrier可以從體系中輕松捕獲微量核酸）,，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,，將鹽,、細胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除
口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑he

yan拭子基因組DNA快速提取試劑盒（離心柱型）

口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑he

目錄號：40310

v 適用范圍：

適合于從口腔/yan拭子中分離純化基因組DNA,。

v 試劑盒組成,、儲存,、穩(wěn)定性： 

本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果

儲存事項：

1. 結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用,。

2. 為避免降低活性，方便運輸,，提供蛋白酶K為凍干粉狀,，收到后，可短暫離心后,，加入1毫升滅菌水溶解,。因為反復凍融可能會降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分裝凍存,，－20℃保存,。

3. 避免試劑長時間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化,、pH值變化,，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

v 產(chǎn)品介紹：

本試劑盒采用特制的進口DNA吸附柱和du特的緩沖液系統(tǒng),，特別適合于從口腔/yan拭子中分離純化基因組DNA,。各種來源樣品裂解消化處理后DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜（特別配備了Acryl Carrier可以從體系中輕松捕獲微量核酸），再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,，將鹽,、細胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。純化后的DNA無雜質(zhì)和PCR抑制劑，可直接適用于PCR分析,。

v 產(chǎn)品特點：

1. 不需要使用有毒的苯fen等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟,。

2. 節(jié)省時間,，簡捷，單個樣品操作一般可在20分鐘內(nèi)完成,。

3. 配備了Acryl Carrier 用于充分收集特別微量DNA,。 

4. 多次柱漂洗確保高純度，提取的DNA 純度高,，質(zhì)量穩(wěn)定可靠,，可適用于各種常規(guī)操作，包括PCR,、酶切,、測序、Southern 雜交等。

v 注意事項：

1. 所有的離心步驟均在室溫完成,，使用轉(zhuǎn)速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機,，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

2. 開始實驗前將需要的水浴先預熱到特定溫度備用,。

3. 結(jié)合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,，操作時戴乳膠手套，避免沾染皮膚,、眼睛和衣服,。若沾染皮膚、眼睛時,，要用大量清水或者生理鹽水沖洗,。

4. Acryl Carrier：

1) Acryl Carrier 使用方法：如果起始處理量很少（口腔yan拭子上收集到的細胞很少），我們推薦使用Acryl Carrier,，如果預期有較大量DNA產(chǎn)量,，用戶可以根據(jù)需要選擇是否加入Acryl Carrier。使用時在每個樣品提取所需400μl結(jié)合液CB 中加入4μl Acryl Carrier,，將結(jié)合液CB 與Acryl Carrier溶液充分顛倒混勻即可(結(jié)合液CB容易起泡沫,請勿使用渦旋振蕩混勻),。也可根據(jù)樣品數(shù)量，在總共需要的結(jié)合液CB中加入總共需要的Acryl Carrier混勻備用,?；旌弦涸谑覝?4小時內(nèi)穩(wěn)定。

v 操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請先在15ml漂洗液WB中加入60ml無水乙醇,，充分混勻,，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

取樣：取一根醫(yī)用消毒棉簽（手不要碰觸脫脂棉部位）,，伸進口腔,，緊靠臉頰內(nèi)側(cè)來回刮拭20次（不時旋轉(zhuǎn)棉棒），需充分接觸口腔粘膜,。

注意事項：避免用手觸及棉簽,，采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料污染,，取樣前30分鐘內(nèi)應該避免進食或者飲水,。 

1. 用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下，放入2ml 離心管中,，加入400μl裂解液ML,。

2. 再加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，立刻渦旋振蕩充分混勻,，56℃放置1小時,，期間每10分鐘渦旋混勻10秒,。

3. 加入400μl結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻,，70℃放置10分鐘,。

如果拭子上細胞數(shù)量少，導致提取的基因組DNA產(chǎn)量過低, 可以在400μl結(jié)合液CB 中加入4μl Acryl Carrier ,。

4. 冷卻后加200μl 無水乙醇,，立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心以除去管蓋內(nèi)壁的液滴,，收集所有的液體到管底,。

如果周圍環(huán)境高于25℃,乙醇需要冰上預冷后再加入。

5. 將上一步混合物加入一個吸附柱AC中,，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30-60秒,，倒掉收集管中的廢液。

棉簽的棉花可能還吸附一些液體,，如果要提高產(chǎn)量,，可以用干凈鑷子夾擠出液體后棄棉花，減少棉花上液體殘留,。

6. 加入500μl抑制物去除液IR,，12,000rpm 離心30秒，棄廢液,。

7. 加入500μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!）,，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液,。

8. 加入500μl漂洗液WB,，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液,。

9. 將吸附柱AC放回空收集管中,，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液,，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應,。

10. 取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中,，在吸附膜的中間部位加20－50μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預熱效果更好），室溫放置1分鐘,，12,000rpm離心1分鐘,。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置1分鐘,，12,000rpm離心1分鐘,。

洗脫體積越大,，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高,，可以適當減少洗脫體積,，但是最小體積不應少于20μl，體積過小降低DNA洗脫效率,，減少DNA產(chǎn)量,。

11. DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放,，可以放置在－20℃,。

v 問題與解決方法：

 

口腔/yan拭子基因組DNA快速提取試劑he