λ噬菌體載體廣泛用于文庫篩選,，目的克隆培養(yǎng)獲得大量的噬菌體顆粒需要提取λ噬菌體DNA來開展測(cè)序等后續(xù)工作。λ噬菌體裂解培養(yǎng)物離心后的上清,，首先用RNase A /DNase I混合酶消化去除殘留的宿主菌DNA/RNA,，沉淀收集噬菌體，噬菌體被SDS裂解,，殘留碎片通過沉淀離心去除掉,。
λ噬菌體基因組DNA快速提取試劑盒-現(xiàn)貨

λ噬菌體基因組DNA快速提取試劑盒（離心柱型）

λ噬菌體基因組DNA快速提取試劑盒-現(xiàn)貨

目錄號(hào)：40212

v 適用范圍：

適用于快速λ噬菌體DNA

v 試劑盒組成、儲(chǔ)存,、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果,。

儲(chǔ)存事項(xiàng):

1. 在RNase A管和DNase I管分別加入1毫升的裂解緩沖液吹打，顛倒混勻,，充分溶解RNase A和DNase I后,， 按照每次使用量分裝－20℃凍存，有效期6個(gè)月,。

2. 結(jié)合液LB低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用,。

3. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā),、氧化、pH值變化,，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子,。

v 產(chǎn)品介紹：

λ噬菌體載體廣泛用于文庫篩選，目的克隆培養(yǎng)獲得大量的噬菌體顆粒需要提取λ噬菌體DNA來開展測(cè)序等后續(xù)工作,。λ噬菌體裂解培養(yǎng)物離心后的上清,，首先用RNase A /DNase I混合酶消化去除殘留的宿主菌DNA/RNA，沉淀收集噬菌體,，噬菌體被SDS裂解,，殘留碎片通過沉淀離心去除掉,。裂解物上清中的λ噬菌體DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,，將鹽,、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,，最后低鹽的洗脫緩沖液將λ噬菌體DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。

v 產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 不需要使用有毒的苯fen等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟,。

2. 節(jié)省時(shí)間,，簡(jiǎn)捷，可用于液體培養(yǎng)裂解物和固體培養(yǎng)板的提取,，單個(gè)樣品操作一般可在1.5小時(shí)內(nèi)完成,。

3. 產(chǎn)量高，典型的產(chǎn)量10ml λ噬菌體裂解培養(yǎng)物上清可以提取約10µg λ噬菌體DNA,。

4. 多次柱漂洗確保高純度,，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9?？梢灾苯佑脕砻盖泻蜏y(cè)序,。

v 注意事項(xiàng)：

1. 使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的冷凍離心機(jī)。

2. 開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到37℃?zhèn)溆谩?/span>

3. 需要自備氯仿,，20％SDS,。

  4. 結(jié)合液LB含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套,，避免沾染皮膚,，眼睛和衣服。若沾染皮膚,、眼睛時(shí),，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

v 操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）

以10 ml噬菌體感染細(xì)菌培養(yǎng)上清提取舉例：

提示：

e 第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇,，充分混勻,，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!

e 將噬菌體沉淀液放在冰上預(yù)冷,。

1. 將0.5% lv仿處理后的λ噬菌體感染的液體培養(yǎng)物10,000g（約12,000rpm）4℃離心10分鐘去除細(xì)胞碎片和殘?jiān)?/span> 

轉(zhuǎn)速不能過高,，時(shí)間不能過長(zhǎng)，否則噬菌體可能和碎片一起沉淀,，降低產(chǎn)量,。

2. 取10ml上清，加入20μl RNase和20μl DNase充分混勻37℃溫育30分鐘,。

每個(gè)噬菌體培養(yǎng)上清因生長(zhǎng)和裂解情況不同而殘留RNA/DNA量不等,。RNase/DNase消化過頭,，可能減少產(chǎn)量；消化不wan全,，可能未消化的DNA/RNA和細(xì)胞碎片粘去部分噬菌體減低產(chǎn)量并/或者導(dǎo)致最后污染宿主菌DNA,，因此應(yīng)該根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)節(jié)用量和消化時(shí)間。

3. 加入2 ml 冰預(yù)冷的噬菌體沉淀液,，輕柔充分混勻后置冰上冷卻（培養(yǎng)板裂解物必須在冰上放置30分鐘）,。

4. 10,000g（12,000rpm）4℃離心10分鐘,，棄上清,，干燥1分鐘。沉淀下來的噬菌體外觀為透亮或者稍白的沉淀,。

5. 加入500μl裂解緩沖液,，吹打重懸噬菌體，加入100μl 20％SDS,，立即輕柔顛倒混勻4-6次后,，70℃溫育10分鐘，然后置冰上冷卻,。

6. 加入100μl雜質(zhì)沉淀液,，立即輕柔顛倒混勻4-6次，最高速13,000g 4℃離心10分鐘,。

7. 仔細(xì)將上清轉(zhuǎn)入新的離心管,，加入350μl結(jié)合液LB，輕柔渦旋混勻,。

8. 將上述混合物加入一個(gè)吸附柱AC中,，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液,。

吸附柱一次最多只可以容納大約700μl混合物,，因此需要分次把混合物上到吸附柱內(nèi)，重復(fù)步驟8,。

9. 加入700μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!）,，12,000rpm 離心30秒，棄廢液,。

10. 可選步驟：重復(fù)步驟9一遍,。

11. 將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘,，盡量除去漂洗液,， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

12. 取出吸附柱AC,，放入一個(gè)干凈的離心管中,，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 50℃水浴中預(yù)熱）,，室溫放置1分鐘，12,000rpm 離心1分鐘,。如果想得到較多量的DNA,，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，12,000rpm離心1分鐘,。

洗脫體積越大,，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高,，可以適當(dāng)減少洗脫體積,， 但是最小體積不應(yīng)少于40μl，體積過小降低DNA洗脫效率,，減少DNA產(chǎn)量,。

13. DNA可以存放在2-8℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放,，可以放置在-20℃,。

v 問題與解決方法:

 

λ噬菌體基因組DNA快速提取試劑盒-現(xiàn)貨