超純土壤基因組DNA快速提取試劑盒

超純土壤基因組DNA快速提取試劑he

目錄號：40217

v 適用范圍：

適用于快速提取各種土壤基因組DNA

v 試劑盒組成,、儲存,、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果,。

儲存事項:

1. 溶液LYS或者抑制物去除液IR低溫時可能出現析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用,注意不要劇烈搖晃,，以免產生大量氣泡。

2. 為避免降低活性,，方便運輸,，提供蛋白酶K為凍干粉狀，收到后,，可短暫離心后,，加入1毫升滅菌水溶解，因為反復凍融可能會降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存,，－20℃保存,。

3. 避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發(fā)、氧化,、pH值變化,，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

v 產品介紹：

普通的手提或者試劑盒提取的土壤基因組DNA由于常常殘留有PCR的強烈抑制物如腐殖酸,、棕黃酸等雜質造成實驗失敗,，此外，由于采用了劇烈的玻璃珠擊打來破裂菌體,，常常造成DNA剪切和降解,。本公司經過長期研發(fā)開發(fā)出了具有自主知識產權的土壤基因組DNA，通過zhuan利配方的腐殖酸和棕黃酸去除試劑配合特殊處理的純化柱,，可以zui大程度的去除這些雜質,，同時加上多次柱漂洗，確保得到的DNA具有ji gao純度,，此外du特的抽提和裂解體系可以迅速裂解細胞（壁）和滅活細胞內核酸酶,，不需要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組DNA的完整性,。

v 產品特點：

1. 本公司du有的zhuan利配方和純化柱能有效去除腐殖酸等雜質,。

2. 不需要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組DNA的完整性,，長度可達30kb -50kb,，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應,。

3. 兼容性強,，適用于各種不同的土壤包括淤泥等提取困難的土壤。

4. 多步驟去除各種雜質和抑制物,，保證了ji高純度,，OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9。

5. 不需要使用有毒的苯fen等試劑,，也不需要乙醇沉淀等步驟,。

6. 快速，簡捷,，單個樣品操作一般可在60分鐘內完成。

v 注意事項：

1. 所有的離心步驟均在室溫完成,，使用轉速可以達到13,000rpm的傳統臺式離心機,，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

2. 開始實驗前根據需要將水浴預熱到37℃或者70℃?zhèn)溆谩?/span>

3. 溶液S3和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套,，避免沾染皮膚,，眼睛和衣服。若沾染皮膚,、眼睛時,，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,，不影響下游酶切,、連接等反應。也可以使用水洗脫,，但應該確保批pH大于7.5,， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應該保存在－20℃,。DNA如果需要長期保存,，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA,，pH 8.0）,，但是EDTA可能影響下游酶切反應，使用時可以適當稀釋,。

v 操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請先在漂洗液WB和溶液S3中加入指ding量無水乙醇,，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇,，以免多次加入!

1. 取0.2克土壤放入離心管,，用牙簽或者槍頭搗碎后加入0.5ml溶液SUS，用槍頭攪拌后短暫渦旋幫助重懸,。

如果預計土壤里面含有較多難裂解的菌類如革蘭氏陽性菌,，可先在0.5ml溶液SUS里面加入10mg的溶菌mei，吹打混勻后再加入,，并加做步驟2,。

2. （可選步驟）:37℃溫育30分鐘，每10分鐘顛倒混勻幾次,。

對于難裂解的菌類如革蘭氏陽性菌含量豐富的土壤,，并在上一步驟加入了溶菌mei的樣品，需要加做此步驟來幫助裂解,。 

3. 加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液,，短暫渦旋幫助混勻。

可選做步驟: 為提高產量,，可以在37℃振蕩10分鐘或者渦旋振蕩2分鐘,。（注意渦旋振蕩可能剪切DNA）

4. 加入120μl 溶液LYS,，短暫渦旋混勻，65℃溫育30分鐘,，期間顛倒混勻幾次,。

65℃溫育時間可以根據具體樣品種類和產量進行延長或者縮短以取得優(yōu)良產量和純度，可在10分鐘－2小時范圍內調整,。

5. （可選步驟）:于－70℃冷凍,，65℃融化，反復3次,。

對于難裂解的菌類如革蘭氏陽性菌含量豐富的土壤,， 可加做此步驟來幫助裂解。 

6. 顛倒混勻后,，13,000 rpm離心2分鐘,小心轉移上清至新的離心管（記錄上清體積）,。

7. 加入1/3(三分之一)體積的溶液S1,顛倒幾次，渦旋5秒混勻后,，冰上放置5分鐘,。

8. 13,000 rpm離心5分鐘,小心轉移上清至新的離心管（記錄上清體積）。

9. 加入1/3(三分之一)體積的溶液S2,顛倒幾次,，短暫渦旋混勻后,，冰上放置5分鐘。

該步驟主要是進一步去除humic substance等PCR抑制物質以提高純度,，但是會降低一些產量,，如果對產量要求高或者提取的DNA不用于PCR，可以嘗試略去此步驟以提高產量,。如果預計土壤成份復雜PCR抑制物質多,，可以適當提高S2加入量(如加入等體積的S2)，可以提高純度,，但是注意也會顯著降低產量,。

10. 13,000 rpm離心5分鐘,小心轉移上清至新的離心管（記錄上清體積）。

11. 加入1.5倍體積的溶液S3（請先檢查是否已加入無水乙醇!）,顛倒幾次,，短暫渦旋混勻,。

12. 將上一步混合物700μl（包括可能有的沉淀）加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）,，12,000rpm離心30-60秒,，倒掉收集管中的廢液。重復直到所有的混合物都加完,。

13. 加入500μl抑制物去除液IR,，12,000 rpm 離心30秒，棄廢液,。

14. 加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!）,，12,000 rpm 離心30秒,，棄掉廢液。

15. 加入500μl漂洗液WB,，12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液,。

16. 將吸附柱AC放回空收集管中,，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液,，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應,。

17. 取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中,，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預熱效果更好）,， 室溫放置3-5分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘,。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,，室溫放置2分鐘，12,000 rpm離心1分鐘,。

洗脫體積越大,，洗脫效率越高，如需要DNA濃度較高,，可以適當減少洗脫體積,， 但是最小體積不應少于50μl，體積過小降低DNA洗脫效率,，減少DNA產量,。

18. DNA可以存放在2-8℃,如果要長時間存放，可以放置在－20℃,。

超純土壤基因組DNA快速提取試劑he