du特的結(jié)合液/蛋白酶K迅速裂解細胞和滅活細胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,，抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。
海洋動物組織基因組DNA快速提取試劑盒-現(xiàn)貨

海洋動物組織基因組DNA快速提取試劑盒（離心柱型）

海洋動物組織基因組DNA快速提取試劑盒-現(xiàn)貨

目錄號：40317

適用于快速提取各種海洋動物組織基因組DNA

v 試劑盒組成、儲存,、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果

儲存事項:

1. 結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用,。

2. 為避免降低活性,、方便運輸，提供蛋白酶K為凍干粉狀,，收到后,，可短暫離心后，加入1ml滅菌水溶解,，因為反復凍融可能會降低酶活性,，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存，－20℃保存,。

3. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā),、氧化、pH值變化,，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子,。

v 產(chǎn)品介紹：

du特的結(jié)合液/蛋白酶K迅速裂解細胞和滅活細胞內(nèi)核酸酶，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,，抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

v 注意事項：

洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,，不影響下游酶切,、連接等反應。也可以使用水洗脫,，但應該確保批pH大于7.5,，pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應該保存在－20℃,。DNA如果需要長期保存,，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA,，pH 8.0）,，但是EDTA可能影響下游酶切反應，使用時可以適當稀釋,。

v 操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請先在漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇,，充分混勻,，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

1. 切取不多于30mg 的組織材料,，放入裝有180μl組織裂解液SL的1.5ml離心管中,，渦旋振蕩15 秒。

 根據(jù)提取的組織不同,，起始量也稍有不同,，腮的細胞量較大，一般建議提取量不超過20mg,。如果裂解困難,，可先用液氮研磨。

2. 加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml),，立刻渦旋振蕩充分混勻,。將裂解物放置在55℃水浴1-3小時或者直到組織消化wan全。

不同組織裂解時間不同,，通常需0.5–2小時即可完成,。扇貝組織0.5小時基本可裂解wan全，蝦和魚類組織1小時,。每小時振蕩混合樣品2-3次,，每次振蕩混勻15 秒。

可選做步驟: 如果RNA殘留較多,，需要去除RNA,，可在完成步驟2后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振蕩混勻,，室溫放置5-10分鐘,。

3. 加入200μl 結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻,，70℃放置10分鐘,。

4. 冷卻后加100μl 異丙醇，充分顛倒或渦旋振蕩充分混勻,，此時可能出現(xiàn)絮狀沉淀,。

5. 將上一步混合物和可能的沉淀都加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心60秒,，倒掉收集管中的廢液,。

 如果有不溶組織物可能堵住槍頭，可將槍頭在吸水紙上輕蹭去除不溶物,；如果吸上來的混合物少則可以將槍頭和不溶物一起棄去,，該做法是為了去除不溶物，以免堵塞離心柱,。

 上述步驟中立刻渦旋或者吹打充分混勻非常重要,，混勻不充分嚴重降低產(chǎn)量,，必要時如樣品粘稠不易混勻時可以渦旋振蕩15秒混勻。

6. 加入500μl抑制物去除液IR,，12,000rpm 離心30秒,，棄廢液。

7. 加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!）,，12,000rpm 離心30秒,，棄掉廢液。

8. 加入500μl漂洗液WB,，12,000rpm離心30秒,，棄掉廢液。

9. 將吸附柱AC放回空收集管中,，13,000rpm離心2分鐘,，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應,。

10. 取出吸附柱AC,，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB （洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預熱效果更好）,， 室溫放置3-5分鐘,，12,000rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,，室溫放置2分鐘,，12,000rpm離心1分鐘。

洗脫體積越大,，洗脫效率越高,，如果需要DNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積,，但是最小體積不應少于50μl,，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量,。

11. DNA可以存放在2-8℃，如果要長時間存放,，可以放置在－20℃,。

海洋動物組織基因組DNA快速提取試劑盒-現(xiàn)貨