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北京諾博萊德科技有限公司

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北京諾博萊德科技有限公司>>分子生物學試劑>>核酸提取>> 40211M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒現(xiàn)貨
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40211M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒現(xiàn)貨

  • 公司名稱:
  • 更新時間:
  • 所 在 地:
  • 生產地址:
  • 瀏覽次數(shù):
  • 北京諾博萊德科技有限公司
  • 2025-04-22 15:37:17
  • 北京市
  • 北京
  • 211

我要詢價

【簡單介紹】

品牌 NobleRyder/諾博萊德 貨號 40211
規(guī)格 50次 供貨周期 現(xiàn)貨
主要用途 適用于快速提取M13噬粒單鏈DNA 應用領域 環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,制藥/生物制藥
M13和其它的絲狀噬菌體載體,,在文庫構建和為序列測序提供單鏈DNA和引人突變方面十分有用,。將適量M13絲狀噬菌體或者相關噬粒(M13來源)感染的液體培養(yǎng)物離心,上清中的單鏈噬菌體DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜
M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒現(xiàn)貨

【詳細說明】

M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒 打印


M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒現(xiàn)貨

目錄號:40211

目錄編號

包裝單位

40211-50

50次

40211-100

100次

40211-200

200次

適用范圍:

適用于快速提取M13噬粒單鏈DNA

試劑盒組成,、儲存,、穩(wěn)定性:

試劑盒組成

保存

50次

100次

200次

結合液MB

室溫

25ml

50ml

100ml

漂洗液WB

室溫

15ml

25ml

2×25 ml

第一次使用前按說明加指ding量乙醇

洗脫緩沖液EB

室溫

10ml

20ml

40ml

吸附柱AC

室溫

50個

100個

200個

收集管(2ml)

室溫

50個

100個

200個

本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果。

儲存事項:

1. 結合液MB低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,,可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,,恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發(fā),、氧化,、pH值變化,各溶液使用后應及時蓋緊蓋子,。

產品介紹:

M13和其它的絲狀噬菌體載體,,在文庫構建和為序列測序提供單鏈DNA和引人突變方面十分有用。將適量M13絲狀噬菌體或者相關噬粒(M13來源)感染的液體培養(yǎng)物離心,,上清中的單鏈噬菌體DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜,,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,將鹽,、細胞代謝物,,蛋白等雜質去除,最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈噬菌體單鏈DNA從硅基質膜上洗脫,。

產品特點:

1. 不需要使用有毒的苯fen等試劑,,也不需要乙醇沉淀等步驟。

2. 節(jié)省時間,,簡捷,,單個樣品操作一般可在10分鐘內完成。

3. 產量高,,典型的產量800µl M13絲狀噬菌體上清可以提取3µg噬菌體單鏈DNA,。 

4. 多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達1.7~1.9,??梢灾苯佑脕頊y序,,一般典型可辨認讀長達650bp。 

注意事項:

1. 所有的離心步驟均在室溫完成,,使用轉速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機,,如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

2. 開始實驗前將需要的水浴先預熱到50℃?zhèn)溆谩?/span>

3. 結合液MB含有刺激性化合物,,操作時要戴乳膠手套,,避免沾染皮膚,眼睛和衣服,。若沾染皮膚,、眼睛時,要用大量清水或者生理鹽水沖洗,。

操作步驟:(實驗前請先閱讀注意事項)

以800μl噬菌體感染細菌培養(yǎng)上清提取舉例:

提示:第一次使用前請先在漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇,充分混勻,,加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇,,以免多次加入!

1. 將M13絲狀噬菌體或者相關噬粒(M13來源)感染的液體培養(yǎng)物分裝在1.5毫升離心管,12,000rpm離心5分鐘沉淀菌體,。

2. 小心取800μl上清轉入新的1.5ml離心管,,加入400μl結合液MB,充分混勻,。

如果使用的上清大于或者小于800μl,,則結合液MB的用量需要按照比例增加或者減少。

3. 將上述混合物加入一個吸附柱AC中,,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm離心15秒,,倒掉收集管中的廢液。

吸附柱一次最多只可以容納大約700μl混合物,,因此需要分次把混合物加到吸附柱內,,重復步驟3。

4. 加入700μl漂洗液WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!),,12,000rpm 離心30秒,,棄廢液。

5. 將吸附柱AC放回空收集管中,,13,000rpm離心2分鐘,,盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應,。

6. 取出吸附柱AC,,放入一個干凈的離心管中,在吸附膜的中間部位加60μl洗脫緩沖液EB(洗脫緩沖液事先在 50℃水浴中預熱),, 室溫放置1分鐘,,12,000rpm 離心1分鐘,。如果想得到較多量的DNA,可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,,10,000rpm離心1分鐘,。

洗脫體積越大,洗脫效率越高,,如果需要DNA濃度較高,,可以適當減少洗脫體積, 但是最小體積不應少于40μl,,體積過小降低DNA洗脫效率,,減少DNA產量。

7. DNA可以存放在2-8℃,,如果要長時間存放,,可以放置在-20℃。

 

附錄(M13噬菌體感染細菌培養(yǎng)上清準備過程):

下面舉例說明M13噬菌體感染細菌培養(yǎng)上清準備過程,,詳細的M13噬菌體(或M13來源噬粒)培養(yǎng)和上清準備過程請參見『分子克隆』第二版,。

1. 37℃ 振搖過夜培養(yǎng)合適的噬菌體宿主菌。

2. 使用6%的過夜培養(yǎng)菌接種新鮮的LB培養(yǎng)液,,37℃振搖培養(yǎng)一個小時,。

3. 根據(jù)M13噬菌體的儲存液的濃度(滴度)按照0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌體來感染宿主菌。37℃振搖培養(yǎng)5-6個小時,。

4. 將上面M13絲狀噬菌體或者相關噬粒(M13來源)感染的液體培養(yǎng)物分裝在1.5毫升離心管,,12,000rpm離心5分鐘沉淀菌體。

5. 可選步驟: 小心取1毫升上清轉入新的1.5ml離心管,,重復步驟4離心5分鐘,。

這步有助于去除上清中殘留的微量宿主菌RNA或者DNA。

6. 小心取800μl上清轉入新的1.5ml離心管,。

7. 現(xiàn)在可以按照操作步驟提取噬菌體單鏈DNA了,。

問題與解決方法:

問題

評論與建議

低核酸產量
或者純度不高

*試劑盒儲存在非最佳條件-建議:收到試劑盒后總是存放在室溫(15℃-20℃)

*緩沖液或者試劑暴露于減少它們有效性的條件下-建議:儲存在室溫(15℃-20℃),每次用完后立刻蓋緊蓋子,,以免溶液蒸發(fā),,pH改變和污染。

*漂洗液WB中忘記加無水乙醇-建議:第一次實驗時,,在漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇,。

*試劑和樣品沒有充分混勻-建議:加入每個試劑后都要充分混勻

*噬菌體上清滴度太低-建議:離心取噬菌體感染細菌培養(yǎng)物上清時離心最好不要超過5分鐘,轉速不要超過12,000rpm,,否則噬菌體上清也可能離心下來,。重新培養(yǎng)一次噬菌體感染細菌

*洗脫效率不高-建議:確保做了步驟5,否則殘留乙醇會影響洗脫

DNA下游酶切
不能切開或者
酶切不wan全

*忘記做步驟5,乙醇抑制了酶切反應-建議:做步驟5,,然后空氣中晾幾分鐘,,讓殘留乙醇揮發(fā)。

*一些硅基質膜成分一起洗脫下來,,抑制了酶切反應-建議:將洗脫的基因組DNA溶液13,000rpm再離心一分鐘,,小心取上清使用

純化的DNA
產物D260
數(shù)值異常偏高

*一些硅基質膜成分一起洗脫下來,干擾了分光光度計讀數(shù)-建議:將洗脫的回收DNA溶液13,000rpm再離心一分鐘,,小心取上清使用,。

 

M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒現(xiàn)貨

    
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