M13和其它的絲狀噬菌體載體,，在文庫構(gòu)建和為序列測序提供單鏈DNA和引人突變方面十分有用,。將適量M13絲狀噬菌體或者相關(guān)噬粒（M13來源）感染的液體培養(yǎng)物離心，上清中的單鏈噬菌體DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜
M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒現(xiàn)貨

M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒 打印

M13噬菌體單鏈基因組DNA快速提取試劑盒現(xiàn)貨

目錄號：40211

v 適用范圍：

適用于快速提取M13噬粒單鏈DNA

v 試劑盒組成,、儲存,、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果,。

儲存事項:

1. 結(jié)合液MB低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用,。

2. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā),、氧化、pH值變化,，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子,。

v 產(chǎn)品介紹：

M13和其它的絲狀噬菌體載體，在文庫構(gòu)建和為序列測序提供單鏈DNA和引人突變方面十分有用,。將適量M13絲狀噬菌體或者相關(guān)噬粒（M13來源）感染的液體培養(yǎng)物離心,，上清中的單鏈噬菌體DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,，將鹽,、細胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除,，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈噬菌體單鏈DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。

v 產(chǎn)品特點：

1. 不需要使用有毒的苯fen等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟,。

2. 節(jié)省時間，簡捷,，單個樣品操作一般可在10分鐘內(nèi)完成,。

3. 產(chǎn)量高，典型的產(chǎn)量800µl M13絲狀噬菌體上清可以提取3µg噬菌體單鏈DNA,。 

4. 多次柱漂洗確保高純度,，OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9?？梢灾苯佑脕頊y序,，一般典型可辨認讀長達650bp,。 

v 注意事項：

1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機,，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機,。

2. 開始實驗前將需要的水浴先預(yù)熱到50℃?zhèn)溆谩?/span>

3. 結(jié)合液MB含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套,，避免沾染皮膚,，眼睛和衣服。若沾染皮膚,、眼睛時,，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

v 操作步驟:（實驗前請先閱讀注意事項）

以800μl噬菌體感染細菌培養(yǎng)上清提取舉例:

提示：第一次使用前請先在漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇,，充分混勻,，加入后請及時在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!

1. 將M13絲狀噬菌體或者相關(guān)噬粒（M13來源）感染的液體培養(yǎng)物分裝在1.5毫升離心管,，12,000rpm離心5分鐘沉淀菌體,。

2. 小心取800μl上清轉(zhuǎn)入新的1.5ml離心管，加入400μl結(jié)合液MB,，充分混勻,。

如果使用的上清大于或者小于800μl，則結(jié)合液MB的用量需要按照比例增加或者減少,。

3. 將上述混合物加入一個吸附柱AC中,，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心15秒，倒掉收集管中的廢液,。

吸附柱一次最多只可以容納大約700μl混合物,，因此需要分次把混合物加到吸附柱內(nèi)，重復(fù)步驟3,。

4. 加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!）,，12,000rpm 離心30秒，棄廢液,。

5. 將吸附柱AC放回空收集管中,，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液,，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng),。

6. 取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中,，在吸附膜的中間部位加60μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 50℃水浴中預(yù)熱）,， 室溫放置1分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。如果想得到較多量的DNA,，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,，10,000rpm離心1分鐘。

洗脫體積越大,，洗脫效率越高,，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積,， 但是最小體積不應(yīng)少于40μl,，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量,。

7. DNA可以存放在2-8℃,，如果要長時間存放，可以放置在－20℃,。

 

v 附錄（M13噬菌體感染細菌培養(yǎng)上清準備過程）:

下面舉例說明M13噬菌體感染細菌培養(yǎng)上清準備過程,，詳細的M13噬菌體（或M13來源噬粒）培養(yǎng)和上清準備過程請參見『分子克隆』第二版。

1. 37℃ 振搖過夜培養(yǎng)合適的噬菌體宿主菌,。

2. 使用6％的過夜培養(yǎng)菌接種新鮮的LB培養(yǎng)液,，37℃振搖培養(yǎng)一個小時。

3. 根據(jù)M13噬菌體的儲存液的濃度（滴度）按照0.5-1.5%(V/V)的比例加入噬菌體來感染宿主菌,。37℃振搖培養(yǎng)5-6個小時,。

4. 將上面M13絲狀噬菌體或者相關(guān)噬粒（M13來源）感染的液體培養(yǎng)物分裝在1.5毫升離心管，12,000rpm離心5分鐘沉淀菌體,。

5. 可選步驟: 小心取1毫升上清轉(zhuǎn)入新的1.5ml離心管,，重復(fù)步驟4離心5分鐘。

這步有助于去除上清中殘留的微量宿主菌RNA或者DNA,。

6. 小心取800μl上清轉(zhuǎn)入新的1.5ml離心管,。

7. 現(xiàn)在可以按照操作步驟提取噬菌體單鏈DNA了。

v 問題與解決方法:

 

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