適用于快速提取植物基因組DNA
改進(jìn)的經(jīng)典 CTAB 植物 DNA 抽提液內(nèi)（添加多種針對(duì)植物特點(diǎn)的多糖,、多酚去除成份）迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，氯仿抽提后通過(guò)離心清除多糖,、多酚和蛋白質(zhì)（根據(jù)需要,，上清中還加入異丙醇離心沉淀基因組 DNA,，進(jìn)一步去除其它各種雜質(zhì)）
CTAB植物基因組DNA快速提取試劑he-現(xiàn)貨

CTAB植物基因組DNA快速提取試劑he（離心柱型）

CTAB植物基因組DNA快速提取試劑he-現(xiàn)貨

目錄號(hào)：40114

適用范圍：

適用于快速提取植物基因組DNA

試劑盒組成、儲(chǔ)存,、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 12 個(gè)月不影響使用效果,。

儲(chǔ)存事項(xiàng):

1. 裂解液PL、結(jié)合液 PQ或者抑制物去除液IR低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,，可以在 55℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā),、氧化,、pH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子,。

產(chǎn)品介紹：

改進(jìn)的經(jīng)典CTAB植物DNA抽提液內(nèi)（添加多種針對(duì)植物特點(diǎn)的多糖,、多酚去除成份）迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，氯仿抽提后通過(guò)離心清除多糖,、多酚和蛋白質(zhì)（根據(jù)需要,，上清中還加入異丙醇離心沉淀基因組 DNA，進(jìn)一步去除其它各種雜質(zhì)）,，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,，再通過(guò)一系列快速的漂洗－離心的步驟， 進(jìn)一步將多糖,、多酚和細(xì)胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜,，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好,?？朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2. 不需要使用有毒的苯fen等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟,。快速,，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在1小時(shí)內(nèi)完成,。

3. 數(shù)種去多糖,、多酚成份和多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280 典型的比值達(dá)

4. 1.7～1.9,，長(zhǎng)度可達(dá)30kb -50kb,，可直接用于 PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)

注意事項(xiàng)：

1. 所有的離心步驟均在室溫完成,，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī),，如Eppendorf 5415C或者類似離心機(jī)。

2. 開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到65℃備用,。

3. 需要自備氯仿/異戊醇（體積比24：1混合）,、無(wú)水乙醇和β-巰基乙chun。

4. 結(jié)合液PQ和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,，操作時(shí)要戴乳膠手套,，避免沾染皮膚、眼睛和衣服,。若沾染皮膚,、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗,。

5. 不同來(lái)源的植物組織材料中提取DNA 的量會(huì)有差異,，一般100mg新鮮組織典型產(chǎn)量可達(dá)3-25μg。

洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,，不影響下游酶切,、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫,，但應(yīng)該確保pH大于7.5,，pH過(guò)低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃,。DNA如果需要長(zhǎng)期保存，可以用TE緩沖液洗脫 （10mM Tris-HCl,， 1mM EDTA,，pH8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng),，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋,。    

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）提示：

e 第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB和結(jié)合液PQ中加入指ding量的無(wú)水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇,，以免多次加入!

e 取所需適量裂解液PL放置在 65℃預(yù)熱,，使用前加入β-巰基乙chun到終濃度2%。

1. 取適量植物組織（新鮮組織100mg或干重組織30mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細(xì)粉,。

2. 轉(zhuǎn)移細(xì)粉到一個(gè)1.5ml離心管,，不要解凍，加600μl 65℃預(yù)熱的裂解液PL(確認(rèn)已加入β-巰基乙chun至 2%),，劇烈渦旋振蕩混勻,，用大口徑槍頭輕柔吹打幫助裂解。

（如果組織裂解困難,，可根據(jù)需要加一個(gè)輕柔勻漿 10 秒的步驟幫助裂解,。）

3. 65℃水浴 20-60 分鐘，在水浴過(guò)程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次,。

（可選:如果組織干燥或者產(chǎn)量低,，可以適當(dāng)延長(zhǎng)水浴時(shí)間。如果 RNA 殘留多,，可在水浴前加入 6μl RNA 酶（20mg/ml）,。）

4. 加入700μl氯仿/異戊醇（體積比 24：1混合），顛倒充分混勻幾分鐘（或者渦旋混勻）,，13,000rpm離心5分鐘,。

（若提取的植物組織富含多糖多酚，可以在第 4 步前用等體積酚/氯仿（1：1）抽提一遍,。）

5. 小心吸取上清到一個(gè)新的1.5ml離心管,，注意不要吸到界面物質(zhì)。

（如上清比較渾濁,，則需要重復(fù)步驟4一遍,，直到得到透亮上清。）

6. 較精確估算上清量,，加入 1.5 倍體積結(jié)合液 PQ （請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!）

后立刻渦旋,，充分混勻。此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀,，但不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

7. 將上一步所得混合物（包括可能出現(xiàn)的沉淀）加入一個(gè) DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30秒,，倒掉收集管中的廢液（先加 700μl 離心,，棄廢液，再加入剩余的溶液,，再次離心）,。

8. 加入 500μl抑制物去除液 IR,，12,000rpm 離心 30 秒，棄廢液,。

9. 加入700μl漂洗液 WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!）,，12,000rpm離心 30秒，棄掉廢液,。

10. 加入500μl漂洗液 WB,，12,000rpm離心30秒，棄掉廢液,。

11. 將DNA吸附柱放回空收集管中,，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液,， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng),。

12. 取出DNA吸附柱，放入一個(gè)干凈的離心管中,，在吸附膜的中央加 100μl洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱）,，室溫放置 3-5分鐘，12,000rpm離心1分鐘,。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,，室溫放置 2 分鐘，12,000rpm離心1分鐘,。

（洗脫體積越大,，洗脫效率越高，如果預(yù)計(jì)和需要產(chǎn)量高,，可增大洗脫體積,，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積,，但是最小體積不應(yīng)少于 50μl,，體積過(guò)小降低 DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量,。）

13. DNA可以存放在 2-8℃,，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在－20℃,。

附錄（低DNA含量或者產(chǎn)量低樣品操作步驟）：

1. 取適量植物組織（新鮮組織400mg或干重組織200mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細(xì)粉,。

2. 轉(zhuǎn)移細(xì)粉到一個(gè)15ml離心管，不要解凍,，加入9ml 65℃預(yù)熱的裂解液PL(確認(rèn)已經(jīng)加入 β-巰基乙chun至 2%),，劇烈渦旋振蕩混勻，用大口徑槍頭吹打幫助裂解,。

（如果組織裂解困難，可根據(jù)需要加一個(gè)輕柔勻漿 10 秒的步驟幫助裂解。）

3. 室溫放置 60分鐘,，中間不時(shí)顛倒離心管以混合樣品數(shù)次,。

（如果組織干燥或者產(chǎn)量低，可以放置在 65℃水浴,。）

4. 加 4.5ml氯仿/異戊醇（體積比24：1混合）,，渦旋充分混勻，3,000g離心10分鐘,。

5. 小心吸取上清到一個(gè)新的15ml離心管,，注意不要吸到界面物質(zhì)。重復(fù)一遍步驟 4,。

6. 小心吸取上清到一個(gè)新的15ml離心管,，估算上清量，加入0.7倍體積的異丙醇,，渦旋混勻來(lái)沉淀DNA,。

7. 立刻 3,000g離心20分鐘沉淀 DNA，棄上清,，顛倒離心管口放在紙巾上控干殘留液體,，并小心用用移液槍吸干沉淀周圍殘留液體（不要過(guò)于干燥 DNA 沉淀）。

8. 加入300μl－400μl預(yù)熱到 65℃的滅菌水,，重新溶解DNA,，可能需要在 65℃短暫溫育幫助溶解，期間不斷輕彈管底幫助溶解,。

9. 加入1.5倍體積結(jié)合液 PQ（450μl－600μl,，請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!）后立刻渦旋，充分混勻,。此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀,，但不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

10. 后續(xù)步驟和上面標(biāo)準(zhǔn)操作步驟7開始后wan全一樣,。

CTAB植物基因組DNA快速提取試劑he-現(xiàn)貨