適用于從動物組織,、培養(yǎng)細(xì)胞中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA。
本試劑盒采用du特的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA,，無需酚氯仿等 有毒試劑,，也無需進(jìn)行耗時的醇類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性雜質(zhì),，得到基因組DNA,，無蛋白、核酸酶污染,，可直接進(jìn)行PCR,、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗。
組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑he

FlashPure Tissue/Cell Genomic DNA Kit

動物組織/細(xì)胞基因組 DNA 提取試劑he

（離心柱型）

組織/細(xì)胞基因組DNA快速提取試劑he

目錄號:40017

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑:

無水乙醇,，RNase A（可選）

保存條件:

室溫（15~25℃）

蛋白酶K,，室溫可保存 6 個月，4℃保存 12 個月,，- 20℃保存 2 年,。

產(chǎn)品簡介:

適用于從動物組織、培養(yǎng)細(xì)胞中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA,。

本試劑盒采用du特的裂解液,，利用硅膠膜特異吸附DNA，無需酚氯仿等有毒試劑,，也無需進(jìn)行耗時的醇類沉淀,，最大限度的去除蛋白及其他抑制性雜質(zhì)，得到基因組DNA,，無蛋白,、核酸酶污染，可直接進(jìn)行PCR,、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗,。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1. 簡便快速：30 min內(nèi)可獲得高純度的基因組DNA。

2. 安全無毒：無需苯fen/氯仿抽提,。

3. 高純：OD260/280=1.7～1.9,，長度可達(dá)30～50kb，可直接進(jìn)行 PCR,、酶切和雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗,。

注意事項:

1. 如果裂解液TL、結(jié)合液CB,、抑制物去除液IR有沉淀析出,，可在37℃水浴 溶解，搖勻后使用。

2. 開始實(shí)驗前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>

3. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,，不影響下游酶切,、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫,，但應(yīng)該確保批pH大于7.5,，pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃,。DNA如果需要長期保存,，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA,，pH 8.0）,，但是EDTA可能影響下游 酶切反應(yīng)，使用時可以適當(dāng)稀釋,。

操作步驟:

第一次使用前,，請先在漂洗液 WB 中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標(biāo)簽,。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行,。

1. 柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl平衡液，12,000rpm離心1min,，棄濾液,，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當(dāng)天處理過的柱子）

2. 材料處理：

a. 動物組織

將動物組織在液氮中研磨成細(xì)粉（或者用解剖dao切成小碎塊）,，取約 25mg轉(zhuǎn)入1.5ml離心管中,，加入180μl裂解液TL，再加入20μl蛋白酶K溶液,，振蕩至che底懸浮,，56℃水浴1~3小時，直至組織wan全消化溶解,。

推薦樣本投入量：動物組織≤25 mg,，動物脾臟≤10 mg。

鼠尾樣本投入量：大鼠尾巴最大用量為0.6 cm長片段,，小鼠鼠尾巴最大用量為1.2cm長片段,，并將裂解時間延長至6-8小時。

注意：水浴過程中,，每10分鐘顛倒混勻一次,，可促進(jìn)細(xì)胞裂解。

b. 培養(yǎng)細(xì)胞

①  105~ 106懸浮細(xì)胞到一個 1.5 ml 離心管,；對于貼壁細(xì)胞，應(yīng)該先 用胰蛋白mei消化后吹打下來收集,。

②  13,000rpm離心10sec,，吸棄上清,，留下細(xì)胞團(tuán)和大約 10~20μl 殘留的液體。

③  加入200μl 1× PBS,，振蕩至細(xì)胞充分懸浮,，洗滌細(xì)胞去除雜質(zhì)，13,000rpm離心10sec,，wan全吸棄上清,。

④  再次加入 180 μl 1× PBS，振蕩混勻,，使細(xì)胞che底懸浮,。

⑤  加入20μl蛋白酶K溶液，充分混勻,。

3. （可選步驟）加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液,，振蕩混勻，室溫 放置5~10min,。

4.  加入200 μl結(jié)合液 CB,，充分振蕩混勻，70℃水浴或金屬浴處理10 min,。

5. 冷卻后加100μl無水乙醇 (或異丙醇),，充分振蕩混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀,，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠,。

6. 將所得溶液和絮狀沉淀加入一個 DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm離心1min,，DNA 被吸附在膜上,，倒棄濾液。

7. 加入500μl抑制物去除液 IR,，13, 000 rpm 離心 30 sec,，倒棄濾液。

8. 加入600μl漂洗液WB（請檢查是否已加入無水乙醇）,，13, 000rpm離心30sec,，倒棄濾液。

9. 重復(fù)步驟 9 一遍,。

10. 將DNA吸附柱放回空收集管中,，13, 000 rpm 離心 2 min，盡量除去漂洗液,，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng),。

11. 取出DNA吸附柱，放入一個干凈的1.5ml離心管中，向吸附膜的中央加入100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在80 ~ 100℃水浴中預(yù)熱可以提高產(chǎn)量）,，室溫放置3~5min,，13,000rpm離心1min。

12. DNA可以存放在2~ 8℃,，如果要長時間存放,，可以放置在-20℃。

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