Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit（免氯仿）適用于從各種動物組織、細胞中同時提取出總RNA,、基因組DNA和Protein,，提取全程不需要使用氯仿，得到包含總RNA,，不需要DNaseI消化,，可直接用于RT、RT-PCR,、RT-qPCR,、RACE、芯片,、測序等,。
動物組織細胞RNA/DNA共提試劑盒 核酸提取

Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit

動物組織/細胞RNA/DNA/Protein共提試劑盒

 動物組織細胞RNA/DNA共提試劑盒 核酸提取

目錄號：91316

產品內容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15~25℃）

產品簡介

Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit（免氯仿）適用于從各種動物組織、細胞中同時提取出總RNA,、基因組DNA和Protein,，提取全程不需要使用氯仿，得到包含總RNA,，不需要DNaseI消化,，可直接用于RT、RT-PCR,、RT-qPCR,、RACE、芯片,、測序等,。基因組DNA也可以直接用于下游的Southern,、酶切,、PCR等各種試驗,。

du特的裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞RNase/DNase，然后裂解混合物RNA/DNA/Protein同時通過一個gDNA吸附柱,，基因組DNA被吸附而RNA/Protein穿透濾過,。gDNA吸附柱上的基因組DNA經(jīng)過一系列漂洗、洗脫后得到純凈基因組DNA,。濾過的總RNA,，先用乙醇調節(jié)結合條件，然后轉入RNA吸附柱,，在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于RNA吸附柱上,，接著通過一系列快速的離心-漂洗-離心-洗脫，得到純凈的總RNA,。濾液經(jīng)選擇性沉淀得到Protein,。

注意事項

1.采集RNA樣本時，把新鮮組織樣本浸入RNAsafe(RNA樣品保存液,，91115-100)中,，可在37℃保存一天，在25℃保存一周,，在4℃保存一個月,，在-20℃或者–80℃長期保存。

2.樣品應避免反復凍融,，否則會影響RNA的提取得率和質量,。

3.提取時，RNA在裂解液MRLPlus中時不會被RNase降解,，但后續(xù)處理過程中應使用不含RNase的吸頭和器皿,。

4.樣品在加入裂解液MRLPlus并勻漿后，可在–80℃保存一個月以上,。

5.所有的溶液應該是澄清的,，如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀，此時不應該直接使用,，可在37℃水浴加熱幾分鐘,，即可恢復澄清。

重要提示：

①第一次使用前,請先在漂洗液RW,、70%乙醇,、漂洗液WB瓶中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶上的標簽,。

②所有離心步驟均需要在室溫（15~25℃）下進行,，提取效果更佳！

具體產品的參數(shù)以收到產品說明書的參數(shù)為準

操作步驟

1.動物組織：

a．電動勻漿：取新鮮組織10~20mg加入500μl裂解液MRL Plus,，電動勻漿,，直到無明顯組織塊即可,。

b．液氮研磨：液氮研磨組織成細粉，取10~20mg組織細粉加入500μl裂解液MRL Plus,，劇烈渦旋振蕩，直到無明顯粉末團即可,。

c．將裂解物13,000rpm離心3min,，沉淀不能裂解的碎片。

d．下接操作步驟3,。

2.細胞

a.懸浮細胞：離心收集細胞,，加入500μl裂解液MRL Plus（<8x10⁶細胞）,吹打混勻，劇烈渦旋振蕩20sec,，充分裂解,。

b.貼壁細胞：不需要消化，吸棄培養(yǎng)基后,，直接在培養(yǎng)皿/板中加裂解液MRLPlus（每<8x10⁶細胞加500μl裂解液MRLPlus）進行消化,、裂解；或者,，先用胰mei消化后離心收集細胞,，然后加入裂解液MRL Plus，吹打混勻,，劇烈渦旋振蕩20sec,，充分裂解。

c.下接操作步驟3,。

3.將裂解勻漿物（或離心得到的上清）全部加入gDNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中）,，13,000rpm離心1min，基因組DNA被吸附在膜上,，保留濾液（RNA/Protein在濾液中）,。

把gDNA吸附柱放入2.0ml離心管，置于4℃度,，以備提取DNA用,。

以下是總RNA的提取步驟：

4.向濾液中加入等體積的70%乙醇，用移液器吹打混勻,。

5.每次轉移≤750μl濾液混合物至RNA吸附柱中,，13,000rpm離心1min，此時,，RNA被吸附在膜上,，保留濾液，以備提取Protein,。

濾液中含有Protein,，請轉入一個合適大?。ㄖ辽?倍濾液體積）的離心管，用于步驟18開始的Protein提取,。

6.加入700μl去蛋白液RW1,，室溫放置1min,13,000rpm離心30sec，倒棄濾液,。

7.加入500μl漂洗液RW（檢查是否已加入乙醇）,，13,000rpm離心30sec，倒棄濾液,。

8.重復步驟7,。

9.將RNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm離心2min,，除去膜上殘留的乙醇,。

10.取出RNA吸附柱，放入RNase-free1.5ml離心管中,，向RNA吸附膜的中央部位懸空滴加30~50μl的RNase-freeH2O,，室溫放置1min，13,000rpm離心1min,，管底即總RNA,。

11.得到RNA，可直接用于下游實驗,，或于-70℃保存,，以免降解。

以下是DNA的提取步驟：

12.向步驟3的gDNA吸附柱中,，加入500μl抑制物去除液IR,，12,000rpm離心30sec，倒棄濾液,。

13.加入700μl漂洗液WB（檢查是否已加入乙醇）,，12,000rpm離心30sec，倒棄濾液,。

14.加入500μl漂洗液WB,，12,000rpm離心30sec，倒棄濾液,。

15.將DNA吸附柱放回空收集管中,，13,000rpm離心2min，盡量除去漂洗液,，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應,。

16.取出gDNA吸附柱，放入新的1.5ml的離心管中，向吸附膜的中央懸空滴加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65~70℃水浴中預熱效果更好）,，室溫放置3~5min,，12,000rpm離心1min。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,，室溫放置2min,，12,000rpm離心1min。

17.得到的DNA可以存放在2~8℃,，如果要長時間存放,，可以放置在-20℃。

以下是提取Protein的步驟：

18.向步驟5的濾液中加入等體積的緩沖液APP,，渦旋振蕩混勻，室溫放置15min沉淀Protein,。

19.13,000rpm離心5~10min,，小心棄上清。加入0.5ml70%乙醇,，顛倒混勻后,，離心1min，小心棄上清,，留下蛋白沉淀,，盡量將殘留液體用移液器吸干凈。

20.室溫晾干沉淀5~10min,，注意一定讓乙醇揮發(fā)干凈,，以免影響下游試驗。

21.將蛋白沉淀溶解于30~150μl1x蛋白上樣緩沖液（如需要蛋白定量,，緩沖液中不應該加入溴酚蘭）或其它下游試驗要求的緩沖液中,。

由于裂解液MRLPlus強變性作用或者不同蛋白等電點，蛋白可能溶解比較困難,，用移液器吹打幫助溶解或者改變PH值幫助蛋白溶解,，短暫離心取上清使用?；蛘哂?%SDS或者8M尿素幫助溶解蛋白沉淀后做蛋白定量,。如果需要BCA蛋白定量可能需要把8M尿素稀釋到3M。

22.95℃放置5min溶解和變性蛋白,，回復到室溫,，最高速離心1min，取上清進行SDS-PAGE電泳或者westernblot等試驗,。

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