FlashPure Bacteria miRNA Mini Kit 是專用于提取各種植物組織的miRNA（包含 miRNA 的總 RNA）,，是通用型 microRNA 快速提取試劑盒（Cat#91015）的升級版,，提取過程不再需要使用氯仿,，并采用du有的 gDNA 過濾器,，高效濾除基因組
細菌microRNA快速提取試劑盒（免lv仿）

FlashPure Bacteria miRNA Mini Kit

細菌 microRNA 快速提取試劑盒（免lv仿）

細菌microRNA快速提取試劑盒（免lv仿） 

目錄號：91613

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

溶菌mei,，常溫運輸,， 4℃保存,；其他組分,，室溫（15 ~ 25℃）保存。

產(chǎn)品簡介

市場上常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit,，不能有效吸附回收miRNA,；Trizol 沉淀抽提法也不能有效沉淀回收全部 miRNA（生物通上有專題文章闡述）。

FlashPure Bacteria miRNA Mini Kit 是專用于提取各種植物組織的miRNA（包含 miRNA 的總 RNA）,，是通用型 microRNA 快速提取試劑盒（Cat#91015）的升級版，提取過程不再需要使用氯仿,，并采用du有的 gDNA 過濾器,，高效濾除基因組，得到包含 miRNA 的總 RNA,，可直接用于 miRNA和 mRNA 的 RT,、RT-PCR、RT-qPCR,、RACE,、芯片、測序等,。

注意事項

1. 樣品應避免反復凍融,，否則會影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量。

2. 樣品加入裂解液 BRL Plus 勻漿后，樣品可在–80℃保存一個月以上,。

重要提示：

① 第一次使用前, 請先在 Wash Solution 1,、Wash Solution 2/3 中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標簽,。

② 每次操作前,，請先配制添加了溶菌mei或者 Lysostaphin 的 TE (PH 8.0)，終濃度為 1mg/ml,。

③ 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進行,，提取效果更佳！

操作步驟（可得到包含 miRNA 的總 RNA）

1. 離心收集 1 ~ 2 ml 菌液（108 ~ 109細胞）到一個 1.5 ml 離心管, 盡可能che底吸棄上清,。

2. 根據(jù)細胞的種類和數(shù)量,，充分重懸細胞在 100 μl（5x108細胞）/ 200 μl（5x108 ~7.5x108 細胞）TE 中（確保已添加溶菌mei或者 Lysostaphin 至TE 中，濃度為 1mg/ml ),，或者直接用 TE 重懸后,，用干凈槍頭挑取少許溶菌mei加入。

3. 室溫(15~25℃)溫育5min/溶菌mei, 或者37℃溫育15min / Lysostaphin,，破解細胞壁,。每 2 min 渦旋振蕩 10 sec，幫助破壁,。

注意：各種細菌破壁的難易程度不一樣,，一般革蘭氏陰性菌 E.coli 使用上面的條件就足夠了，,甚至可能省略該步驟,，但是某些革蘭氏陽性菌如B. subtilis 難破壁需要提高溶菌mei濃度到 15mg/ml 和溫育時間到10min,。如果金黃色葡萄球jun需要加入 lysostaphin 到 1mg/ml，37℃溫育 15min,?？傊煌毦愋推票陔y易程度不同，有的難破壁的種類

需要根據(jù)用戶自己的具體情況調(diào)節(jié)酶的種類,、工作濃度和溫育溫度,、時間，此外還可以聯(lián)合使用玻璃珠擊打,，機械破壁,，蛋白酶 K 消化等方法幫助破壁。

4. 短暫離心收集細菌,，che底吸棄上清后,，加入500μl裂解液 BRL Plus，渦旋震蕩或者吹打混勻,，裂解細菌,。

5. 物將裂解勻漿液全部加到 gDNA 過濾器中（過濾器放入收集管中）,，13,000 rpm 離心 1 min，保留濾液,，（RNA/microRNA 在濾液中）,。

6. 用移液器較精確估計濾液體積（一般 480 μl），向濾液中加入 1.25 倍體積(一般 600μl )的無水乙醇,，吹打混勻,。

7. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm離心1min,，此時,，RNA 被吸附在膜上，棄濾液,。重復此過程,，直到溶液全部上柱。

8. 加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙醇）,，室溫放置 1 min,13,000 rpm 離心 30 sec,，棄濾液。

9. 加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙醇）,，13,000 rpm離心 30 sec,，棄濾液。

10. 重復步驟 7,。

11. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中,，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的留乙醇,。

12. 取出 RNA 吸附柱,，放入一個 RNase-free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央懸空滴加 30-50 μl 的 RNase-free H2O,，室溫放置 1 min,，13,000 rpm 離心 1 min，管底即包含 miRNA 的總 RNA,。

附錄：

microRNA 富集方法（僅僅提取 microRNA,，不包含>200 nt 其它總 RNA成份。一般不推薦）

注意：當非特異擴增較多或者擴增背景較高時,，可以嘗試使用富集方法提取的 microRNA。

1. 按照前面步驟 1,、2 操作,，直到得到上清。

2. 轉(zhuǎn)移上清（約 500 μl）至一個新的離心管中,，加入 0.5 倍體積的無水乙醇（必須是室溫的）,，吹打混勻。

3. 將混合液加入 gDNA 過濾器中，13,000 rpm 離心 1 min,，收集濾液 （microRNA 在濾液中）,。

此時，RNA吸附柱的膜上是去除了microRNA的總RNA（mRNA,、tRNA,、rRNA），如果有需要,，可以按照前面標準操作步驟 6－10 操作,，經(jīng)漂洗、洗脫后,，得到去除了 microRNA 的總 RNA,。

4. 較精確估計濾液體積，加入等體積的無水乙醇（必須是室溫的）,，吹打混勻,，不要離心。

5. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中,，13,000 rpm離心1 min,，micoRNA 被吸附在膜上，倒棄濾液,。重復此過程,，直到所有濾液混合物都上柱。

6. 按照前面標準操作步驟 6－10,，經(jīng)漂洗,、洗脫后，得到 microRNA,。

相關產(chǎn)品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR,，加尾法）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）

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