PAX Blood miRNA Kit設計用于從儲存在保存試劑和PAXgene®中的血液樣品中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）;血液 RNA 管,。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑，從而產生高質量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應用。
PAX Blood microRNA Kit 核酸提取

PAX Blood miRNA Kit (For PAXgene Blood RNA Tube)

PAX Blood microRNA Kit   核酸提取

目錄號：91511

產品簡介

PAX Blood miRNA Kit設計用于從儲存在保存試劑和PAXgene®中的血液樣品中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）;血液 RNA 管。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑,，從而產生高質量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應用。

從保存試劑中取出樣品,。對于儲存在 PAXgene 中的血液樣本®血液 RNA 管，通過離心收集細胞,。樣品在含有蛋白酶 K 的優(yōu)化緩沖液下洗滌和裂解,。將樣品離心以去除細胞碎片和其他顆粒,。用異丙醇調整結合條件后，將樣品上樣到 RNA 結合柱上,。通過短暫的離心或真空步驟,，樣品通過結合 RNA/miRNA 的柱基質。經過三個洗滌步驟后,，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA,。

產品特點

配套PAXgene采血/RNA保存管提取血液microRNA

Kit Contents and Storage

注意：蛋白酶 K 是一種凍干物。離心幾秒鐘,，然后用 1 ml 蒸餾水等分溶液復溶,。在 –20 °C 下儲存。 避免反復凍融,。所有試劑在指ding溫度下儲存時,，可穩(wěn)定保存 9 個月。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

描述
PAX Blood miRNA Kit設計用于從儲存在保存試劑和PAXgene® Blood RNA Tube中的血液樣本中分離總RNA>18個核苷酸（包括miRNA）,。該程序可wan全去除污染物和酶抑制劑,，從而產生高質量的 RNA。使用 PAX Blood miRNA 試劑盒純化的 RNA 可直接用于 RT-PCR 等應用,。

從保存試劑中取出樣品,。對于儲存在 PAXgene® Blood RNA Tubes 中的血液樣本，通過離心收集細胞,。樣品在含有蛋白酶 K 的優(yōu)化緩沖液下洗滌和裂解,。將樣品離心以去除細胞碎片和其他顆粒。用異丙醇調整結合條件后,，將樣品上樣到 RNA 結合柱上,。通過短暫的離心或真空步驟，樣品通過結合 RNA/miRNA 的柱基質,。經過三個洗滌步驟后,，用不含 RNase 的水洗脫純化的 RNA/miRNA。

用戶提供的材料和設備：

1. 微量離心機的離心能力為 13,000 x g

2. 100% 異丙醇

3. 不含 RNase 的過濾移液器吸頭

4. 不含 RNase 的水

5. 1.5 或 2.0 ml 微量離心管

6. 搖動培養(yǎng)箱或加熱塊,，溫度可達 55°C,、65°C

7. 帶水平轉子的離心機，離心力可達 5,500 x g

注意：
     shou次使用前,，將規(guī)定量的乙醇加入洗滌液中

溶液 1 和洗滌溶液 2/3 瓶,，充分混合，并用勾號標記瓶子,。

將培養(yǎng)箱或加熱塊加熱至 55°C,。

1. 使用水平轉子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA 管 10 分鐘。

2. 吸出并丟棄上清液。
     3. 加入 4 mL 不含 RNase 的水,。渦旋以wan全重懸沉淀,。
     4. 使用水平轉子以 3,000-5,000 x g 的離心力離心 PAXgene® Blood RNA Tube 10 分鐘。
     5. 吸出并丟棄上清液,。

注意：不wan全去除上清液會降低裂解效率并稀釋裂解物,，從而降低 RNA 產量。

6. 加入 350 μl 重懸緩沖液,。渦旋以wan全重懸沉淀,。
     7. 將樣品轉移到新的 1.5 ml 微量離心管中。
     8. 加入 300 μL 結合緩沖液和 20 μL 蛋白酶 K 溶液,。渦旋 5 秒鐘以充分混合,。

9. 使用振蕩培養(yǎng)箱在 55°C 下孵育 10 分鐘。
    10. 可選：將裂解物通過安裝在注射器上的 20 號針頭（直徑 0.9 mm）至少 5 次,，或使用電子組織勻漿器勻漿,。此步驟剪切基因組 DNA，降低裂解物的粘度,，并提高產量,。

11. 將勻漿以 13,000 rpm 離心 3 min。將上清液轉移到新的離心管中,。
     12. 加入等體積的 100% 異丙醇,。渦旋充分混合。
     13. 將最多 700 μl 混合物轉移至 2 ml 收集管（提供）中的 RNA 結合柱中,。

14. 以最大速度離心 1 分鐘。
     15. 吸出并丟棄濾液,，重復使用收集管,。
     16.重復步驟 13-15，直到剩余樣品轉移到 RNA 結合柱中,。

17. 加入 350 μl 洗滌液 1.
     18. 以最大速度離心 1 分鐘,。
     19. 吸出并丟棄濾液，重復使用收集管,。
     20. 對于每個 RNA 結合柱,，準備 DNase I 消化

反應混合物如下：

重要說明：
     • DNase I 非常敏感，容易發(fā)生物理變性,。不要渦旋 DNase I 混合物。倒置試管輕輕混勻,。
     • 在 RNA 分離之前新鮮制備 DNase I 儲備液,。
     • 標準 DNase 緩沖液與膜上 DNase I 消化不兼容。使用其他緩沖液可能會影響 RNA 與基質的結合，并可能降低 RNA 產量和純度,。

• 所有步驟必須在室溫下進行,。快速但小心地工作,。

21. 將 50 μl DNase I 消化反應混合物直接移液到 RNA 結合柱的中心表面,。

注意：確保將 DNase I 消化混合物直接移液到膜上。如果一些混合物保留在 RNA 結合柱的壁或 O 形圈上,，則 DNase I 消化將不wan全

22. 在室溫下靜置 15 分鐘,。
    23. 加入 350 μl 洗滌液 1.以最大速度離心 1 分鐘。
    24. 吸出并丟棄濾液,，重復使用收集管,。
    25. 加入 500 μl 洗滌液 2/3。以最大速度離心 1 分鐘,。
    26. 吸出并丟棄濾液,，重復使用收集管。
    27. 重復步驟 25-26 進行第二個洗滌液 2/3 洗滌步驟,。

28. 以最大速度離心空的 RNA 結合柱 2 分鐘,，以干燥柱基質。

注意：洗脫前干燥柱膜很重要,。
殘留的乙醇可能會干擾下游應用,。

29. 將 RNA 結合柱轉移到 1.5 mL 微量離心管中。
     30. 將 50-70 μl 不含 RNase 的水直接加入到膜中心（可選：將水預熱至 70–90°C 將增加 RNA 產量）,。在室溫下靜置 1 分鐘,。
     31. 以最大速度離心 2 分鐘。

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