FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit（免氯仿）是通用型 microRNA快速提取試劑盒（Cat91015）的升級版,，專用于提取各種動物組織,、細胞的miRNA（包含 miRNA 的總 RNA），提取過程不再需要使用氯仿,，并采用du有的 gDNA 過濾器
動物組織/細胞microRNA快速提取試劑盒

FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit

動物組織/細胞 microRNA 快速提取試劑盒（免氯仿）

 

動物組織/細胞microRNA快速提取試劑盒

目錄號：91409 

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

產(chǎn)品簡介

FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit（免氯仿）是通用型 microRNA快速提取試劑盒（Cat91015）的升級版,，專用于提取各種動物組織、細胞的miRNA（包含 miRNA 的總 RNA）,，提取過程不再需要使用氯仿,，并采用du有的 gDNA 過濾器，高效濾除基因組,，得到包含 miRNA 的總 RNA,，可直接用于 miRNA 和 mRNA 的 RT、RT-PCR,、RT-qPCR,、RACE、芯片,、測序等,。

但是，市場上常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit,，不能有效吸附回收 miRNA,；Trizol 沉淀抽提法也不能有效沉淀回收全部 miRNA（生物通上有專題文章闡述）。

注意事項

1. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,，否則會影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量,。

2. 樣品加入裂解液 MRL Plus 勻漿后，樣品可在–80℃保存一個月以上,。

3. RNA 在裂解液 MRL Plus 中時不會被 RNase 降解,，但后續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含 RNase 的吸頭和器皿。

4. 取RNA樣本時,，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液,，91115-100)中,，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周,，在 4℃保存一個月,，在-20℃或者–80℃長期保存。

重要提示：

① shou次使用前, 先在 Wash Solution 1,、Wash Solution 2/3,、70%乙醇

中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶上的標(biāo)簽,。

② 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進行,，提取效果更佳,！

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

操作步驟

1. 動物組織：

a．電動勻漿：取新鮮組織 10~20 mg 加入 500 μl 裂解液 MRL Plus,，電動勻漿，直到無明顯組織塊即可,。

b．液氮研磨：液氮研磨組織成細粉,，取 10~20 mg 組織細粉加入500μl 裂解液 MRL Plus，劇烈渦旋振蕩,，直到無明顯粉末團即可,。

c． 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片,。下接操作步驟 3,。

2. 細胞

a. 懸浮細胞：離心收集細胞，加 500 μl 裂解液 MRL Plus（<8x10⁶ 細胞）, 吹打混勻,，劇烈渦旋振蕩20秒,，充分裂解。

b. 貼壁細胞：不需要消化,，吸棄培養(yǎng)基后,，直接在培養(yǎng)皿中加裂解液MRL Plus（每<8x106細胞加500μl 裂解液 MRL Plus）進行消化、裂解,； 或者,，先用胰mei消化后離心收集細胞，然后加入裂解液 MRL Plus,，吹打混勻,，劇烈渦旋振蕩 20 秒，充分裂解,。

c. 下接操作步驟 3,。

3. 將裂解勻漿物（或離心得到的上清）全部加入gDNA過濾器中（過濾器放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min,，保留濾液（RNA 在濾液中）,。

4. 向濾液中加入 1.25 倍體積的無水乙醇,，用移液器吹打混勻。

5. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中,，13,000 rpm離心1min,，此時，RNA 被吸附在膜上,，棄濾液,。重復(fù)此過程，直到溶液全部上柱,。

6. 加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙醇）,，室溫放置 1 min, 13,000 rpm 離心30sec，棄濾液,。

7. 加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙醇）,，13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液,。

8. 重復(fù)步驟 7,。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min,，除去膜上殘留的留乙醇,。

10. 取出 RNA 吸附柱，放入一個新的 RNase-free 1.5 ml 離心管中,，向 RNA吸附膜的中央懸空滴加 30-50 μl RNase-free H2O,， 室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min,，管底即包含 miRNA 的總 RNA,。

11. 得到 RNA/miRNA，可直接用于下游實驗,，或于-70℃保存,，以免降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR,，加尾法）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）

附錄：

microRNA 富集方法（僅僅提取 microRNA,，不包含>200 nt 其它總 RNA成份。一般不推薦）

注意：當(dāng)非特異擴增較多或者擴增背景較高時,，可以嘗試使用富集方法提取的 microRNA,。

1. 按照前面步驟 1、2 操作,，直到得到上清或者裂解物,。

2. 向上清或者裂解物中加入 0.5 倍體積的無水乙醇（必須是室溫的），吹打混勻,。

3. 將全部混合液加入一個 gDNA 過濾器中,， 13,000 rpm 離心 1 min,，收集濾液（microRNA 在濾液中）。

此時,，RNA 吸附柱的膜上是去除了 microRNA 的總 RNA（mRNA,、tRNA、rRNA）,，如果有需要,，可以按照前面標(biāo)準(zhǔn)操作步驟 6－10 操作，經(jīng)漂洗,、洗脫后,，得到去除了 microRNA 的總 RNA。

4. 較精確估計濾液體積,，加入等體積的無水乙醇（必須是室溫的）,，吹打混勻，不要離心,。

5. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中,，13,000 rpm離心1 min,，micoRNA 被吸附在膜上,，倒棄濾液。重復(fù)此過程,，直到所有濾液混合物都上柱,。

6. 按照前面標(biāo)準(zhǔn)操作步驟 6－10，經(jīng)漂洗,，洗脫后,，得到 microRNA。

 

動物組織/細胞microRNA快速提取試劑盒