本產(chǎn)品適用于快速提取骨組織細(xì)胞的總 RNA,，利用多年研制而成的骨組織專用裂解液,，并添加多種成分去除骨組織蛋白多糖,，采用高效的 gDNA 過(guò)濾器,，不需要繁瑣的 DNase I消化,，提取的 RNA,，可直接用于 RT,、RT-PCR,、RACE,、RT-qPCR,、普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、芯片等,。
骨組織總RNA快速提取試劑盒(帶gDNA過(guò)濾器）

FlashPure Bone Total RNA Mini Kit

骨組織 RNA 快速提取試劑盒(帶 gDNA 過(guò)濾器)

骨組織總RNA快速提取試劑盒(帶gDNA過(guò)濾器）

目錄號(hào)：91514

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無(wú)水乙醇

保存條件

室溫（15~25℃）,，有效期 12 個(gè)月。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

骨組織堅(jiān)硬,、骨細(xì)胞密度低,、而且外周基質(zhì)含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和RNA難以分離，無(wú)法用傳統(tǒng)Trizol法進(jìn)行高質(zhì)量提取,。

本產(chǎn)品適用于快速提取骨組織細(xì)胞的總RNA,，利用多年研制而成的骨組織專用裂解液，并添加多種成分去除骨組織蛋白多糖,，采用高效的gDNA過(guò)濾器,，不需要繁瑣的DNase I消化，提取的RNA,，可直接用于RT,、RT-PCR、RACE,、RT-qPCR,、普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、芯片等,。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 高質(zhì)：28s/18s=2:1,，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提取全過(guò)程僅需 30min,！

注意事項(xiàng)

1. 如果 FSL 有析出或者沉淀,，請(qǐng)將其置于 65℃水浴中，重新溶解后使用,。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,，否則會(huì)影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

操作步驟：

提示：

① 第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液RW中加入無(wú)水乙醇，加入量詳見(jiàn)瓶身標(biāo)簽,。

② 操作前,，取1ml裂解液FSL至2.0ml離心管內(nèi)，加入10%的Boneaid,，

（例如：1ml FSL 加100μl Boneaid）,，顛倒混勻后，65℃水浴中預(yù)熱,。

多個(gè)樣本按比例放大,。

③ 所有離心步驟均需要在室溫（15℃～25℃）下進(jìn)行。

1. 液氮研磨法：

a．用骨qian夾碎骨組織,，放入研缽（研缽在 180 度干烤 2 小時(shí)）,，在液氮中反復(fù)研磨成細(xì)粉。

注意：研磨時(shí),，要不斷補(bǔ)加液氮,，保證樣本的研磨在液氮中進(jìn)行。

b．轉(zhuǎn)移 100 mg 細(xì)粉至 65℃預(yù)熱的裂解液 FSL（已加有 Boneaid）中,，立即劇烈渦旋震蕩 30 Sec,，充分混勻。

c．下接步驟 3,。

2. 其它骨組織破碎方法：

a． 取100mg骨組織加入1 ml預(yù)熱的裂解液FSL（已加有 Boneaid）,， 高速均質(zhì)儀粉碎勻漿?；蛘呷?100 mg 液氮冷凍包埋切片粉碎的骨頭加入 1 ml 裂解液 FSL（已加有 Boneaid）粉碎勻漿,。

b． 下接步驟 3。

3. 短暫回放至 65℃水浴 10 min,，中間偶爾顛倒 1～2 次,，幫助裂解。

4. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5 ~10 min,，沉淀不能裂解的碎片。

5. 轉(zhuǎn)移上清至一個(gè)新的 2.0 ml 離心管中,，加入 0.5 倍上清體積的無(wú)水乙醇,，吹打混勻。

6. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 過(guò)濾器中（過(guò)濾器放入收集管）,，13,000 rpm 離心 2 min,，倒棄濾液。此時(shí),，絕大部分 gDNA 被濾除,，RNA 和少量 gDNA 殘留被吸附在膜上，重復(fù)此過(guò)程，直到混合液全部轉(zhuǎn)入 gDNA 過(guò)濾器,。

7. 取出步驟 6 的 gDNA 過(guò)濾器,，放入一個(gè)新的 2.0 ml 離心管中，加入500 μl 裂解液 PRL Plus,，13,000 rpm 離心 1 min,，收集濾液（RNA 在濾液中），向?yàn)V液中加入 250μl 無(wú)水乙醇,，吹打混勻,。

8. 將濾液混合物加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 2 min,，倒棄濾液,。此時(shí)，RNA 被吸附在膜上,。

9. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1,，室溫放置 1min，13,000 rpm 離心 30 sec,，倒棄濾液,。

10. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec,，倒棄濾液,。

11. 重復(fù)步驟 10 一次。

12. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中,，13,000 rpm 離心 2 min,，除去膜上殘留的乙醇。

13. 取出 RNA 吸附柱,，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中,，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O，室溫放置 1 min,，13,000 rpm 離心 1 min,。

14. 提取的總RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn),，或于-70℃保存,，以免降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有 qPCR 儀)

骨組織總RNA快速提取試劑盒(帶gDNA過(guò)濾器）