FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit 是專用于提取細菌（G+,、G-）的總 RNA,，采用高效的 gDNA 過濾器,，不需要繁瑣的 DNase I 消化過程,。得到的 RNA，可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR,、RACE、測序,、芯片等,。
細菌總RNA提取試劑盒 帶gDNA過濾器

FlashPure Plus Bacteria Total RNA Mini Kit

細菌總 RNA 快速提取試劑盒（含 gDNA 過濾器）

 

細菌總RNA提取試劑盒 帶gDNA過濾器

目錄號：91413

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

溶菌mei，常溫運輸,， 4℃保存,；其他組分，室溫（15 ~ 25℃）保存,。

產(chǎn)品簡介

FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit 是專用于提取細菌（G+,、G-）的總 RNA,，采用高效的 gDNA 過濾器,，不需要繁瑣的 DNase I 消化過程。得到的 RNA,，可直接用于 RT,、RT-PCR、RT-qPCR,、RACE,、測序、芯片等,。

產(chǎn)品特點

1. 無毒：免lv仿,、免β-巰基乙chun！

2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1,，OD260/280=2.0～2.2,！

3. 高效：提取全過程僅需 10 min！

重要提示：

① 第一次使用前,，請先在漂洗液 RW 中加入無水乙醇,，詳見瓶身的標簽。

② 每次操作前,，請先配制添加了溶菌mei或者 Lysostaphin 的 TE (PH 8.0),，終濃度為 1mg/ml。

③ 所有離心步驟均需要在室溫（15~25℃）下進行,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

操作步驟：

1. 離心收集 1 ~ 2 ml 菌液（10⁸ ~10⁹細胞）到一個 1.5 ml 離心管, che底吸棄上清,。

2. 根據(jù)細胞的種類和數(shù)量,，充分重懸細胞在 100 μl (5x10⁸細胞) / 200 μl( 5x10⁸~7.5x10⁸ 細胞 ) TE 中（確保溶菌mei或者 Lysostaphin 已添加至 TE 中，濃度為 1mg/ml ),，或者直接用 TE 重懸后,，用干凈槍頭挑取少許溶菌mei加入。

3. 室溫(15~25℃)溫育5min/溶菌mei, 或者37℃溫育15min/ Lysostaphin,，破解細胞壁,。每 2 min 渦旋振蕩 10 sec，幫助破壁,。

注意：各種細菌破壁的難易程度不一樣,，一般革蘭氏陰性菌E.coli使用上面的條件就足夠了，甚至可能省略該步驟,，但是某些革蘭氏陽性菌如B. subtilis難破壁需要提高溶菌mei濃度到15mg/ml和溫育時間到10min,。如果金黃色葡萄球jun需要加入 lysostaphin 到 1mg/ml，37℃溫育 15min,?？傊煌毦愋推票陔y易程度不同，有的難破壁的種類需要根據(jù)用戶自己的具體情況調(diào)節(jié)酶的種類,、工作濃度和溫育溫度,、時間，此外還可以聯(lián)合使用玻璃珠擊打,，機械破壁,，蛋白酶 K 消化等方法幫助破壁。

4. 短暫離心收集細菌,，che底吸棄上清后,，加入 500 μl 裂解液 BRL Plus，渦旋震蕩或者反復吹打,，裂解細菌,。

5. 將裂解勻漿液全部加到 gDNA 過濾器中（過濾器放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min,，保留濾液,，（RNA 在濾液中）。

6. 向濾液中加入等體積（通常為 500 μl）的 70%乙醇,，立即吹打混勻,。

7. 每次轉移≤750 μl 濾液混合物至 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管)，13,000 rpm 離心 1 min,，倒棄濾液,。此時，RNA 被吸附在膜上,，重復此過程,，直到溶液全部上柱,。

8. 加入700μl去蛋白液 RW1,室溫放置1min,13,000rpm 離心30 sec，倒棄濾液,。

9. 加入500μl漂洗液 RW,，13,000rpm 離心30sec，倒棄濾液,。

10. 重復步驟 7,。

11. 把 RNA 吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 離心 2 min,，che底除去膜上的乙醇,。

12. 取出 RNA 吸附柱，放入新的 RNase-free 1.5 ml 離心管中,，向吸附膜的中央部位懸空滴加 30-50μl RNase-Free H2O（事先在 70-90℃水浴中加熱可提高產(chǎn)量）,，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min,。

13. 得到的 RNA,，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存,，以免降解,。

附錄：

一、免液氮直接研磨（自動研磨儀）——適用于新鮮樣本

a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中加入 4 mm 兩粒,，加 600 μl 裂解液 ARL plus,，放進 20 mg 左右的樣本,，設置 65 個頻率,，震蕩 2 min。

b. 將裂解物13,000 rpm 離心 3 min,，沉淀不能裂解的碎片,。

二、液氮研磨（自動研磨儀）:

a. 把研磨模塊丟到液氮中預冷,，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預冷完畢,。

b. 在2.0 ml液氮研磨管中放入 3mm 鋼珠 3 粒，放進 20-30mg 樣本,，

投入液氮中預冷,。

c. 把預冷好的離心管插入研磨模塊中，放進研磨儀,，設置 55 個頻率,，震蕩 30~60 sec。（以北京赫得研磨儀——京N9548為例）

d. 研磨完成后,，馬上加 600 μl 裂解液 ARL Plus,，劇烈渦旋振蕩,充分混勻,。

e. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片,。

相關產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

 

細菌總RNA提取試劑盒 帶gDNA過濾器