FlashPure Blood Total RNA Mini Kit

超純?nèi)?/span> RNA 提取試劑盒（離心柱型）

超純?nèi)俁NA快速提取試劑盒

目錄號(hào)：91215

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無(wú)水乙醇,、β-巰基乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個(gè)月,，不影響使用效果,。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

適用于快速提取新鮮血液的總RNA，RNA可直接用于RT,，RT-PCR,，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,、RACE等,。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2,！

2. 高效：提取全過程僅需 20 min,！

操作步驟

提示：

①所有離心步驟均需要在室溫（15 ~37℃）下進(jìn)行。

②第一次使用前,，請(qǐng)先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指ding量無(wú)水乙醇,。

③操作前，先用 RNase-Free H2O 將 10X 紅細(xì)胞裂解液 RLB 稀釋到 1X,。

1. 在適合大小的 RNase free 離心管中加入 1 體積（0.5-1 ml）各種抗凝劑新鮮血液 (先顛倒混勻后)和 3 體積的紅細(xì)胞裂解液 RLB,，顛倒混勻，可輕彈管壁,，確保混勻。

2. 室溫放置 10 分鐘（期間應(yīng)該顛倒輕彈混勻數(shù)次幫助裂解紅細(xì)胞）,。

注意：如果 RNA 降解嚴(yán)重,，可在冰上裂解，時(shí)間可以長(zhǎng)一些以充分裂解,。

3. 12,000 rpm 離心 20 秒,，倒棄紅色上清，并小心的盡可能多的吸棄上清

（注意不要吸到管底的細(xì)胞團(tuán)）,，留下完整的管底白細(xì)胞團(tuán),。

注意：離心后在管底應(yīng)該見到白色的白細(xì)胞團(tuán)，也可能有一些紅細(xì)胞殘片和白細(xì)胞團(tuán)在一起,，但是如果看到的是大部分的紅色細(xì)胞團(tuán),，說明紅細(xì)胞裂解很不充分，應(yīng)該再加入紅細(xì)胞裂解液,，重懸后重復(fù)步驟 2,，3。

注意：上清盡可能che底吸棄,，殘留過多會(huì)稀釋裂解液,，造成裂解異常，產(chǎn)量純度降低,。

4. 渦旋或者輕彈管壁將白細(xì)胞沉淀wan全松散重懸,，加入 1 ml 裂解液 RL，用移液槍反復(fù)吹打,，充分裂解細(xì)胞,。

5. 將勻漿樣品劇烈震蕩混勻，在室溫（15 -30℃）條件下孵育 5 min,，使得核酸蛋白復(fù)合物wan全分離,。

6. 每1 ml裂解液 RL 加 0.2 ml 氯仿，蓋緊樣品管蓋,，劇烈振蕩 15 sec,，并在室溫下放置2min。

7. 12,，000rpm 離心 10 min,，樣品會(huì)分成三層：下層有機(jī)相，中間層和上層無(wú)色的水相,，RNA 存在于水相中,。水相層的容量大約為所加 RL 體積的 60%，把水相轉(zhuǎn)移到新管中,，進(jìn)行下一步操作,。

8. 向水相中加入等體積 70%乙醇,，吹打混勻。

9. 每次轉(zhuǎn)移≤700 μl 水相混合物至一個(gè) RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中）,，13,000 rpm 離心1 min,，RNA 被吸附在膜上，棄濾液,。重復(fù)此過程,，直到溶液全部上柱。

10. 加500μl去蛋白液 RE,，室溫放置 1 min,，13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液,。

11. 加入500μl漂洗液RW,，13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液,。

12. 重復(fù)步驟 11,。

13. 將 RNA 吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 離心 2 min,，che底除去膜上殘留的乙醇,。

14. 取出 RNA 吸附柱，放入一個(gè)新的 1.5 ml RNase - free 離心管中,，向吸附膜的中央部位懸空滴加30-50μl RNase free H2O（事先在70-90℃水浴中加熱可提高產(chǎn)量）,，室溫放置1min，13,000 rpm 離心1 min,，管底即是RNA溶液,。

15. 提取的RNA可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存,，避免 RNA 降解,。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

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