多糖多酚植物總 RNA 提取試劑盒（gDNA 過濾器）

Polysaccharide/polyphenol Plant Total RNA Mini Kit 

多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒核酸提取

目錄號：91318

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個月,，不影響使用效果,。

產(chǎn)品簡介

適用于快速提取各種植物根、莖,、葉,、花的總RNA，采用gDNA過濾器,，高效濾除gDNA,，得到的總RNA可直接用于RT，RT-PCR,，RT-qPCR,，普通轉(zhuǎn)錄組測序、RACE等,。

成功案例：棉花、海棠,、黑加侖,、煙草、擬南芥,、虎杖,、大豆、草莓,、冬青,、月季花雌蕊、薔薇,、沙棘,、冬棗、蘆薈,、仙人掌,、報春花、水稻,、玉米,、唐菖蒲、櫻桃,、白玉蘭,、毛白楊、櫻花,、葡萄,、百合花,、百合葉子雌蕊雄蕊、紫菜,、綠藻,、香蕉、水仙花,、青花菜,、地被菊、蘋果,、梅花,、番茄、石斛,、毛桃,、苧麻、慈姑,、葛根,、甘肅桃、玫瑰花,、檳榔果,、甜糖菊、硅藻,、牡丹,、胡楊、油桐果,、梨子皮,、板栗花序、青皮云杉,、紅樹根,、鐵線蕨、黃瓜,、小麥,、番木瓜、甘薯,、紫薯,、油松、油茶,、馬尾松,、蕪菁、毛果楊、木薯,、大葉落地生根,、山杏、旱柳,、桉樹,、琵琶花果、麻風(fēng)樹,，沙生槐,、蕎麥...

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 無毒：免氯仿、免β-巰基乙醇,！

2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1,，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全過程僅需 20min,！

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

操作步驟

第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入指ding量無水乙醇,，詳見瓶身的標(biāo)簽。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15 ~37℃）下進(jìn)行,。

1. 材料處理：

a．吸取500μl裂解液PRL,，轉(zhuǎn)入 1.5 ml 離心管中，再加入50 μl糖酚去除劑PAD,，混勻備用,。

注意：糖酚去除劑PAD是提取多糖、多酚,、次級代謝產(chǎn)物多、色素含量豐富的困難樣品bu可或缺的成分,。對于幼嫩的農(nóng)作物葉片等簡單樣本,，不加糖酚去除劑PAD，RNA的產(chǎn)量可能會提高一些,。

b．液氮中研磨植物組織成細(xì)粉,，取≤50mg細(xì)粉轉(zhuǎn)入上述裝有PRL裂解液的離心管中, 劇烈渦旋震蕩30sec，充分混勻,。

冬天氣溫低,，37℃搖床放置3min，可增強(qiáng)裂解效果,，提高產(chǎn)量

c．將裂解物 13,000 rpm 離心 5 ~10 min,，沉淀不能裂解的碎片。

注意：使用1ml裂解液PRL和100μl糖酚去除劑去裂解100mg樣品,，RNA產(chǎn)量會翻倍,。

2. 小心吸取上清（一般 480 μl，注意不要吸到沉淀）轉(zhuǎn)入一個新的 1.5 ml離心管，加入0.5倍體積（一般240μl）的無水乙醇, 吹打混勻,。

3. 每次轉(zhuǎn)移≤750μl上清混合液至gDNA過濾器中,，13,000rpm離心2 min，倒棄濾液,。此時,，絕大部分gDNA被濾除，RNA和少量gDNA殘留被吸附在膜上,，重復(fù)此過程,，直到混合液全部轉(zhuǎn)入gDNA過濾器。

4. 取出步驟3的gDNA過濾器,，放入一個新的2ml離心管中,，加入500μl裂解液PRL Plus，13,000rpm離心1min,，收集濾液（RNA在濾液中）,，向濾液中加入250μl無水乙醇，吹打混勻,。

5. 將濾液混合物加入RNA吸附柱中,，13,000rpm離心2 min，此時,，RNA被吸附在膜上,，倒棄濾液。

6. 加入700μl去蛋白液RW1,，室溫放置1min,，13,000rpm離心30sec，倒棄濾液,。

7. 加入500μl漂洗液RW,，13,000rpm離心30sec，倒棄濾液,。

8. 重復(fù)步驟 7,。

9. 將RNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm離心2 min,，除去膜上殘留的乙醇,。

10. 取出RNA吸附柱，放入RNase-free1.5ml離心管中,，向RNA吸附膜的中央懸空滴加30~50μl的RNase-free H₂O,，室溫放置1min，13,000rpm離心 1min,。

11. 提取的總RNA,，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解,。

附錄：

一,、液氮研磨（自動研磨儀）:

a. 在2.0 ml液氮研磨管中放入3 mm鋼珠3粒，放進(jìn)≤50mg樣本,，投入液氮中預(yù)冷,。把研磨模塊也丟到液氮中預(yù)冷，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢,。

b. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中,，放進(jìn)研磨儀，設(shè)置55個頻率,，震蕩30~60sec,。（以北京赫得京N9548為例）

c. 研磨完成后，馬上加500μl裂解液PRL和50μl糖分去除劑PAD,，劇烈渦旋30sec,。

d. 將裂解物13,000rpm離心5~10min，沉淀不能裂解的碎片,。

二,、免液氮直接研磨（自動研磨儀）——適用于新鮮樣本

a. 在2.0ml液氮研磨管中加入5mm鋼珠1粒，加1ml裂解液PRL和100μl PAD,，放進(jìn)≤100mg樣本,，設(shè)置60個頻率，震蕩2min,。

b. 將裂解物13,000rpm 離心5~10min,，沉淀不能裂解的碎片。

相關(guān)產(chǎn)品： 

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71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

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