高效動物組織/細胞總 RNA 提取試劑盒

FlashPure Plus Tissue/Cell Total RNA Mini Kit 

高效動物組織/細胞總RNA提取試劑盒

目錄號：91451

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃），有效期 12 個月,。

產(chǎn)品簡介

適用于快速提取各種動物組織,、細胞的總 RNA，采用 gDNA 過濾器,，高效濾除gDNA,，不需要繁瑣的DNase I消化過程，提取的RNA,，可直接用于RT,，RT-PCR，RT-qPCR,，普通轉(zhuǎn)錄組測序,、RACE、芯片等,。

產(chǎn)品特點

1. 無毒：免氯仿,、免β-巰基乙醇！

2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1,，OD260/280=2.0～2.2,！

3. 高效：提取全過程僅需 10 min！

重要提示：

① 第一次使用前,，請先在漂洗液 RW 中加入無水乙醇，詳見瓶身標(biāo)簽,。

② 所有離心步驟均需要在室溫（15~25℃）下進行,。

③ 肝臟、脾臟,、腎臟,、胰腺、心臟的樣本投入量不要超過 10 mg,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

操作步驟：

1. 動物組織：

a．電動勻漿：取新鮮組織 10~25 mg,，加入 500μl 裂解液 ACL Plus，電動勻漿,，直到無明顯組織塊即可,。

b．液氮研磨：在液氮中研磨組織成細粉，取 10~25 mg 組織細粉加入500μl裂解液 ACL Plus,，劇烈渦旋振蕩 20 sec,，充分裂解。

c． 將勻漿后裂解物 13,，000 rpm 離心 3 min,。

d．下接步驟 3,。

2. 細胞

a．懸浮細胞：離心收集細胞，加入500 μl裂解液 ACL Plus（<7x106 細胞）,，吹打混勻,，劇烈渦旋振蕩 20 sec，充分裂解,。

b．貼壁細胞：吸棄細胞培養(yǎng)基,，可以直接在培養(yǎng)皿中加裂解液ACL Plus進行消化、裂解,；或先用胰mei消化后離心收集細胞,，再加入裂解液，每<7x106細胞加入500μl裂解液ACL Plus,，吹打混勻,，渦旋振蕩至無明顯細胞團，使其充分裂解,。

貼壁細胞培養(yǎng)數(shù)量表：

3. 將裂解物上清或者裂解物全部加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱中（以下簡稱通用柱）,，13,000 rpm 離心 1 min，丟棄通用柱的內(nèi)管,，保留濾液（RNA 在濾液中）,。

4. 向濾液中加入0.5倍體積（通常為 250 μl）的無水乙醇，吹打混勻,。

5. 將濾液混合物全部加入一個通用柱中,，13,000 rpm 離心1 min，倒棄

濾液,。此時,，RNA被吸附在膜上。

6. 加入700μl去蛋白液 RW1,室溫放置1min,13,000rpm 離心30sec,，倒棄濾液,。

7. 加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 離心30sec,，倒棄濾液,。

8. 重復(fù)步驟 7。

9. 把通用柱放回收集管中,，13,000rpm離心2min,，che底除去膜上殘留的乙醇。

10. 取出通用柱,，放入新的RNase-free 1.5ml離心管中,，向吸附膜的中央懸空滴加30-50μl RNase-Free H2O（事先在70-90℃水浴中加熱可提高產(chǎn)量），室溫放置1min，13,000rpm離心1min,。

11. 得到的RNA,，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存,，以免降解,。

附錄：

一、免液氮直接研磨（自動研磨儀）——適用于新鮮樣本

a. 在2.0ml液氮研磨管中加入4mm兩粒,，加500μl裂解液ACL plus,，放進20mg左右的樣本，設(shè)置65個頻率,，震蕩2min,。

b. 將裂解物13,000 rpm 離心3min，沉淀不能裂解的碎片,。

二,、液氮研磨（自動研磨儀）:

a. 把研磨模塊丟到液氮中預(yù)冷，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢,。

b. 在2.0ml液氮研磨管中放入3mm鋼珠3粒,，放進20-30mg樣本，投入液氮中預(yù)冷,。

c. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中,，放進研磨儀，設(shè)置55個頻率,，震蕩30~60sec,。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）

d. 研磨完成后，馬上加500μl裂解液ACL Plus,，劇烈渦旋振蕩,充分混勻,。

e. 將裂解物13,000rpm離心3min，沉淀不能裂解的碎片,。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

高效動物組織/細胞總RNA提取試劑盒