FlashPure Plus Tissue/Cell/Insect Total RNA Mini Kit 動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲(chóng)總 RNA 提取試劑盒（帶 gDNA 過(guò)濾器）

動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲(chóng)總RNA快速提取試劑盒

目錄號(hào)：91218

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無(wú)水乙醇

保存條件

室溫（15~25℃）,，有效期 12 個(gè)月,。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

適用于快速提取各種動(dòng)物組織、細(xì)胞,、昆蟲(chóng)的總RNA,，gDNA過(guò)濾器高效濾除gDNA，RNA可直接用于RT,，RT-PCR,，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,、RACE 等,。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 無(wú)毒：免氯仿、免β-巰基乙醇,！

2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1,，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全過(guò)程僅需 10 min,！

重要提示：

① 第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液RW中加入無(wú)水乙醇,，詳見(jiàn)標(biāo)簽,。

② 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進(jìn)行。

③ 高豐度樣本（肝臟,、脾臟,、腎臟、胰腺,、心臟）的投入量減半,。

操作步驟：

1. 動(dòng)物組織、昆蟲(chóng)：

a．電動(dòng)勻漿：取新鮮組織 10~20 mg 加入 350μl的裂解液ARL Plus,，電動(dòng)勻漿,，直到無(wú)明顯組織塊即可。

b．液氮研磨：在液氮中研磨組織成細(xì)粉,，取10~20 mg組織細(xì)粉加入350μl裂解液ARL Plus,，劇烈渦旋振蕩20sec，充分裂解,。

注意：裂解 20~30 mg 組織,，需要加入 600 μl 裂解液 ARL Plus。

c． 將勻漿后裂解物13,，000 rpm 離心3min,。

d．下接步驟 3,。

2. 細(xì)胞

a．懸浮細(xì)胞：收集<107懸浮細(xì)胞到一個(gè) 1.5ml 離心管；

貼壁細(xì)胞（培養(yǎng)皿培養(yǎng)）：wan全吸棄培養(yǎng)基后,，直接在培養(yǎng)皿中加入裂解液ARL Plus進(jìn)行消化,、裂解；

貼壁細(xì)胞（細(xì)胞瓶培養(yǎng)）：應(yīng)該先用胰蛋白mei消化后吹打下來(lái)收集,。

b．13,000rpm 離心10sec,，wan全吸棄上清，留下細(xì)胞團(tuán),。

c．輕彈管底使細(xì)胞松散,，然后加入350μl（<5x106 細(xì)胞）或600μl（5x106-1x107細(xì)胞）裂解液ARL Plus，渦旋振蕩,，充分混勻,。

d．下接步驟 3。

貼壁細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)量表：（細(xì)胞數(shù)量＞1x107,，請(qǐng)酌情增加裂解液的用量）

3. 將裂解物上清或者裂解物全部加到gDNA 過(guò)濾器上（過(guò)濾器放在收集管內(nèi)）,，立刻 13,000 rpm 離心1 min，保留濾液（RNA 在濾液中）,。

4. 向?yàn)V液中加入等體積（350μl/600μl）的70%乙醇,，吹打混勻。

5. 每次吸取≤750μl濾液混合物轉(zhuǎn)入一個(gè)RNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中）,，13,000 rpm離心1min,，倒棄濾液。此時(shí),，RNA被吸附在膜上,，重復(fù)此過(guò)程，直到溶液全部上柱,。

6. 加入700μl去蛋白液 RW1,室溫放置 1min,13,000 rpm 離心30sec,，倒棄濾液。

7. 加入500μl漂洗液 RW,，13,000 rpm 離心30sec,，倒棄濾液。

8. 重復(fù)步驟7,。

9. 把RNA吸附柱放回收集管中,，13,000rpm 離心2min，che底除去膜上的乙醇,。

10. 取出RNA吸附柱,，放入一個(gè)RNase-free 1.5ml離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加30-50μl RNase-Free H2O，室溫放置1min,，13,000rpm離心1min,。

11. 得到的RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn),，或于-70℃保存,，以免降解。

附錄： 

一,、免液氮直接研磨（自動(dòng)研磨儀）——適用于新鮮樣本

a. 在2.0ml 液氮研磨管中加入4mm兩粒,，加600μl裂解液ARL plus，放進(jìn)20mg左右的樣本,，設(shè)置65個(gè)頻率,，震蕩2min。

b. 將裂解物13,000rpm離心3min,，沉淀不能裂解的碎片,。

二、液氮研磨（自動(dòng)研磨儀）:

a. 把研磨模塊丟到液氮中預(yù)冷,，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢,。

b. 在2.0ml液氮研磨管中放入3mm鋼珠3粒，放進(jìn)20-30mg 樣本,，投入液氮中預(yù)冷,。

c. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中，放進(jìn)研磨儀,，設(shè)置 55 個(gè)頻率,，震蕩30~60sec。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）

d. 研磨完成后,，馬上加600μl裂解液ARL Plus，劇烈渦旋振蕩,充分混勻,。

e. 將裂解物13,000rpm離心3min,，沉淀不能裂解的碎片。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

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