FlashPure Tissue/Cell/Insect Total RNA Mini Kit

動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲(chóng)總 RNA 提取試劑盒 

動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲(chóng)總RNA快速提取試劑盒

目錄號(hào)：91017

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無(wú)水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）下,，存放 12 個(gè)月，不影響使用效果,。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

適用于快速提取各種動(dòng)物組織,、細(xì)胞、昆蟲(chóng)的總RNA,，RNA可直接用于RT,，RT-PCR，RT-qPCR,，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,、RACE等。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 無(wú)毒：免lv仿,、免β-巰基乙醇,！

2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2,！

3. 高效：提取全過(guò)程僅需 20min,！

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

操作步驟

提示：

第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指ding量無(wú)水乙醇,。

所有離心步驟均需要在室溫（15 ~37℃）下進(jìn)行,。

1. 動(dòng)物組織、昆蟲(chóng)

a. 電動(dòng)勻漿：取新鮮組織 10~20 mg 加入 350 μl 的裂解液 ARL,，電動(dòng)勻漿,，直到無(wú)明顯組織塊即可,。

b. 液氮研磨：轉(zhuǎn)移 350 μl 裂解液 ARL 至 1.5 ml 離心管中。液氮研磨組織成細(xì)粉,，取 10~20 mg 組織細(xì)粉轉(zhuǎn)入裝有裂解液的 1.5ml 離心管中,，劇烈渦旋振蕩，充分裂解,。

( 注意：裂解 20-30 mg 動(dòng)物組織,，需要加入 600μl 裂解液 ARL )

c. 將勻漿后裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，轉(zhuǎn)移上清至新的離心管中,。

d. 下接步驟 3,。

2. 細(xì)胞

a. 懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，加350μl裂解液ARL（<5x106 細(xì)胞）或600μl裂解液ARL（5x106-1x107 細(xì)胞）,，吹打混勻,，劇烈渦旋振蕩，充分混勻,，裂解細(xì)胞,。

b. 貼壁細(xì)胞：不需要消化，徹di吸干培養(yǎng)液后,，直接加裂解液 ARL,，反復(fù)吹打細(xì)胞，幫助裂解,；細(xì)胞培養(yǎng)瓶要先用胰蛋白mei消化后離心收集細(xì)胞,，然后加入裂解液 ARL，吹打混勻,，劇烈渦旋振蕩 20 sec,，充分裂解。

（< 5x106細(xì)胞加 350 μl裂解液 ARL ,；5x106-1x107細(xì)胞加 600 μl 裂解液 ARL）

（一般情況下,，24 孔板、6 孔板,、直徑 3.5cm 的培養(yǎng)皿,，每孔加 350 μl

裂解液 ARL，直徑 6cm 以上的培養(yǎng)容器加 600 μl 裂解液 ARL）

c. 下接步驟 3,。

3. 向上清或者裂解物中加入等體積（通常為 350 μl / 600 μl）的 70%乙醇,，

吹打混勻。

4. 每次轉(zhuǎn)移≤700μl混合物至一個(gè)RNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中）,，13,000rpm離心30sec,，倒棄濾液，此時(shí)RNA被吸附在膜上。重復(fù)此過(guò)程,，直到溶液全部上柱。

5. 加入700μl去蛋白液RW1,，室溫放置1min,，13,000rpm離心30sec，

倒棄濾液,。

6.加入500μl漂洗液 RW,，13,000rpm 離心30sec，倒棄濾液,。

7. 重復(fù)步驟 6,。

8. 將RNA吸附柱放回收集管中，13,000rpm離心2min,，除去膜上乙醇,。

9. 取出RNA吸附柱，放入一個(gè)新的 1.5 ml RNase-free離心管中,，向吸附膜的中央部位懸空滴加30~50 μl RNase free H2O（事先在70-90℃水浴中加熱可提高產(chǎn)量）,，室溫放置1min，13,000 rpm 離心1min,。

10.提取的RNA可直接用于下游實(shí)驗(yàn),，或于-70℃保存，避免RNA降解,。

相關(guān)產(chǎn)品： 

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

附錄：

一,、免液氮直接研磨（自動(dòng)研磨儀）——適用于新鮮樣本

a. 在2.0 ml液氮研磨管中加入4 mm兩粒，加600μl裂解液ARL,，放進(jìn)20mg 左右的樣本,，設(shè)置65個(gè)頻率，震蕩2min,。

b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min,，沉淀不能裂解的碎片。

二,、液氮研磨（自動(dòng)研磨儀）:

a. 把研磨模塊丟到液氮中預(yù)冷,，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢。

b. 在2.0ml液氮研磨管中放入3mm 鋼珠3粒,，放進(jìn) 20-30mg 樣本,，投入液氮中預(yù)冷。

c. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中,，放進(jìn)研磨儀,，設(shè)置55個(gè)頻率，

震蕩30~60sec。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）

d. 研磨完成后,，馬上加600μl裂解液ARL,，劇烈渦旋振蕩,充分混勻。

e. 將裂解物13,000rpm 離心3 min,，沉淀不能裂解的碎片,。

 動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲(chóng)總RNA快速提取試劑盒