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Real-time PCR實驗攻略（基本方法二）2022/3/11
材料與儀器一、關(guān)于TrizolReagent需要的試劑1.Chloroform：氯仿(分析純)2.Isoproplylalcohol：異丙醇(分析純)3.75%Ethanol（inDEPC-treat...
Real-time PCR實驗攻略（基本方法一）2022/3/11
材料與儀器步驟實時熒光定量PCR（Real-TimePCR）實驗流程一、RNA的提取(詳見RNA提取及反轉(zhuǎn)錄)不同組織樣本的RNA提取適用不同的提取方法,，因為Real-TimePCR對RNA樣品的質(zhì)量...
實時熒光定量PCR技術(shù)2022/3/11
原理實時熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法,。材料與儀器細胞樣品RNA提取試劑盒熒光定量PCRM...
補體介導法2022/3/11
原理帶有特異抗原的靶細胞（如正常細胞、腫瘤細胞,、病毒感染細胞）與相應(yīng)抗體結(jié)合后,，在補體的參與下，引起靶細胞膜損傷,，導致細胞膜的通透性增加,、細胞死亡。染料（例如：伊紅-Y,、臺盼藍）可通過細胞膜進入細胞內(nèi)...
輔助方案 TCA 沉淀測定標記摻入量2022/3/10
原理材料與儀器被標記的細胞懸液（見基本方案或備擇方案1～4）0.1％（mV）BSA／0.02%（mV）NaN310%TCA溶液冷凍乙醇連接真空管道的濾過裝置2.5cm玻璃微纖維濾膜（WhatmanGF...
備擇方案 3 長期細胞標記2022/3/10
原理長期標記意味著對細胞進行6～32h持續(xù)的代謝標記。該方法特別適用于研究合成速度相對較慢的蛋白質(zhì)或研究成熟的標記蛋白而不是生物合成的前體,。穩(wěn)定狀態(tài)的標記是長期標記的一種形式,，在此過程細胞和放射性標記...
備擇方案 2 示蹤標記細胞2022/3/10
原理材料與儀器細胞懸液／貼壁細胞[35S]標記L-甲硫氨酸（800Ci／mmol)／[35S]標記蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物PBS(冷凍)37℃示蹤培養(yǎng)基配有液體同位素垃圾閥門的真空吸氣器步驟1.每個時間點和每個...
備擇方案 1 對貼壁細胞2022/3/10
原理材料與儀器貼壁細胞[35S]標記L-甲硫氨酸（800Ci／mmol)／[35S]標記蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物PBS(冷凍)37℃脈沖標記培養(yǎng)基100mm組織培養(yǎng)皿配有液體同位素垃圾閥門的真空吸氣器步驟1.在...
氨基酸代謝標記實驗2022/3/10
原理在含有放射性標記氨基酸的培養(yǎng)基中，短期培養(yǎng)細胞（材料與儀器37℃細胞懸液[35S]標記L-甲硫氨酸（800Ci／mmol)／[35S]標記蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物PBS(冷凍)37℃脈沖標記培養(yǎng)基配有液體同...
誘導與檢測方法2022/2/28
同學A：使用細胞細胞包被液包被細胞培養(yǎng)板,，將傳代或復蘇凍存的人間充質(zhì)干細胞接種到6孔板上,，密度為2×105-3×105cells/cm2或2×105-3×105cells/孔，置于37℃,，5%CO2培...
實用操作RAW264.7細胞傳代處理2022/2/28
一．RAW264.7細胞背景介紹細胞取材于Abelson小鼠白血病病毒誘發(fā)的腫瘤組織,，是科研上尤為常用的炎癥細胞模型之一。該細胞易于增殖,，有高效DNA轉(zhuǎn)染力,，對RNA干擾敏感，常用作轉(zhuǎn)染宿主細胞和復制...
細胞培養(yǎng)的注意事項2022/2/28
01冷凍管應(yīng)如何解凍,？取出冷凍管后,，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化,，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,，必須注意安全,，預防...
您的細胞準備好“開學”了嗎,？2022/2/28
各位老師在進行細胞培養(yǎng)時,，肯定會遇到以下問題：細胞越長越多買的細胞比較貴重節(jié)假日無法照看細胞實驗不順暢需要重新進行實驗這時，我們就需要適當?shù)谋４嬉恍┘毎?，也就是凍存細胞,。細胞凍存是細胞保存的主要方法?..
293T細胞怎樣才能養(yǎng)得好,？2022/2/28
名稱293T[HEK-293T](人胚腎細胞)形態(tài)上皮樣致瘤性+產(chǎn)物或抗原大T抗原生長特性貼壁細胞營養(yǎng)體系DMEM+10%FBS來源：ATCC293[HEK-293]細胞是經(jīng)人腺病毒5（Ad5）轉(zhuǎn)染而...
Biozellen®3D細胞培養(yǎng)基質(zhì)膠在3D細胞球體培養(yǎng)試驗2022/2/21
3D細胞球體培養(yǎng)試驗步驟：A,、試劑制備1,、A基質(zhì)膠：將A基質(zhì)膠溶于37℃水浴槽回溫10分鐘，確認*融解.2,、C緩沖溶液(1X)制備：使用前將10XC緩沖溶液用冰的無細胞培養(yǎng)液(例如：無血清DMEM,、o...
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