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中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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血清系列
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蛋白研究系列
細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染2022/3/14
摘要：通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法及電穿孔等基因轉(zhuǎn)染技術(shù),，將靶基因?qū)爰?xì)胞，一般在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)左右,，靶基因即可在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?8小時(shí)后即可進(jìn)行靶基因表達(dá)的檢測(cè)等實(shí)驗(yàn),。原理：通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo)...
哺乳動(dòng)物細(xì)胞瞬時(shí)基因轉(zhuǎn)移法制備重組蛋白實(shí)驗(yàn)2022/3/14
材料與儀器步驟一,、轉(zhuǎn)染方法對(duì)于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染(Upofection),可以從商業(yè)途徑獲得許多配方，這些配方都具有單一的專（禾刂）化組分,，而且毫無(wú)疑問(wèn),，它們中的大部分都能非常有效地將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)人細(xì)胞。其缺...
斑點(diǎn)濾膜結(jié)合法2022/3/14
原理材料與儀器待測(cè)蛋白質(zhì)樣品10％三氯醋酸（TCA）考馬斯亮藍(lán)凝膠染色液考馬斯亮藍(lán)凝膠脫色液Whatman3MM濾紙步驟1.用鉛筆在3mm濾紙上畫出1cmx1cm大小的方格,；2.在每一方格中心加入3u...
T、B淋巴細(xì)胞分離2022/3/11
原理淋巴細(xì)胞與用溴花二氨基異硫氫化物（簡(jiǎn)稱AET）處理的綿羊紅細(xì)胞（SRBC）混合后,，其中全部T淋巴細(xì)胞均能吸附AET-SRBC,，形成牢固穩(wěn)定而巨大的E-花環(huán)，較正常未處理的SRBC形成的E-花環(huán)百分...
Real-time PCR實(shí)驗(yàn)攻略（基本方法二）2022/3/11
材料與儀器一,、關(guān)于TrizolReagent需要的試劑1.Chloroform：氯仿(分析純)2.Isoproplylalcohol：異丙醇(分析純)3.75%Ethanol（inDEPC-treat...
Real-time PCR實(shí)驗(yàn)攻略（基本方法一）2022/3/11
材料與儀器步驟實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-TimePCR）實(shí)驗(yàn)流程一,、RNA的提取(詳見RNA提取及反轉(zhuǎn)錄)不同組織樣本的RNA提取適用不同的提取方法，因?yàn)镽eal-TimePCR對(duì)RNA樣品的質(zhì)量...
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)2022/3/11
原理實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。材料與儀器細(xì)胞樣品RNA提取試劑盒熒光定量PCRM...
補(bǔ)體介導(dǎo)法2022/3/11
原理帶有特異抗原的靶細(xì)胞（如正常細(xì)胞,、腫瘤細(xì)胞、病毒感染細(xì)胞）與相應(yīng)抗體結(jié)合后,，在補(bǔ)體的參與下,，引起靶細(xì)胞膜損傷，導(dǎo)致細(xì)胞膜的通透性增加,、細(xì)胞死亡,。染料（例如：伊紅-Y、臺(tái)盼藍(lán)）可通過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)...
輔助方案 TCA 沉淀測(cè)定標(biāo)記摻入量2022/3/10
原理材料與儀器被標(biāo)記的細(xì)胞懸液（見基本方案或備擇方案1～4）0.1％（mV）BSA／0.02%（mV）NaN310%TCA溶液冷凍乙醇連接真空管道的濾過(guò)裝置2.5cm玻璃微纖維濾膜（WhatmanGF...
備擇方案 3 長(zhǎng)期細(xì)胞標(biāo)記2022/3/10
原理長(zhǎng)期標(biāo)記意味著對(duì)細(xì)胞進(jìn)行6～32h持續(xù)的代謝標(biāo)記,。該方法特別適用于研究合成速度相對(duì)較慢的蛋白質(zhì)或研究成熟的標(biāo)記蛋白而不是生物合成的前體,。穩(wěn)定狀態(tài)的標(biāo)記是長(zhǎng)期標(biāo)記的一種形式,，在此過(guò)程細(xì)胞和放射性標(biāo)記...
備擇方案 2 示蹤標(biāo)記細(xì)胞2022/3/10
原理材料與儀器細(xì)胞懸液／貼壁細(xì)胞[35S]標(biāo)記L-甲硫氨酸（800Ci／mmol)／[35S]標(biāo)記蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物PBS(冷凍)37℃示蹤培養(yǎng)基配有液體同位素垃圾閥門的真空吸氣器步驟1.每個(gè)時(shí)間點(diǎn)和每個(gè)...
備擇方案 1 對(duì)貼壁細(xì)胞2022/3/10
原理材料與儀器貼壁細(xì)胞[35S]標(biāo)記L-甲硫氨酸（800Ci／mmol)／[35S]標(biāo)記蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物PBS(冷凍)37℃脈沖標(biāo)記培養(yǎng)基100mm組織培養(yǎng)皿配有液體同位素垃圾閥門的真空吸氣器步驟1.在...
氨基酸代謝標(biāo)記實(shí)驗(yàn)2022/3/10
原理在含有放射性標(biāo)記氨基酸的培養(yǎng)基中，短期培養(yǎng)細(xì)胞（材料與儀器37℃細(xì)胞懸液[35S]標(biāo)記L-甲硫氨酸（800Ci／mmol)／[35S]標(biāo)記蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物PBS(冷凍)37℃脈沖標(biāo)記培養(yǎng)基配有液體同...
誘導(dǎo)與檢測(cè)方法2022/2/28
同學(xué)A：使用細(xì)胞細(xì)胞包被液包被細(xì)胞培養(yǎng)板,，將傳代或復(fù)蘇凍存的人間充質(zhì)干細(xì)胞接種到6孔板上,，密度為2×105-3×105cells/cm2或2×105-3×105cells/孔，置于37℃,，5%CO2培...
實(shí)用操作RAW264.7細(xì)胞傳代處理2022/2/28
一．RAW264.7細(xì)胞背景介紹細(xì)胞取材于Abelson小鼠白血病病毒誘發(fā)的腫瘤組織,，是科研上尤為常用的炎癥細(xì)胞模型之一。該細(xì)胞易于增殖,，有高效DNA轉(zhuǎn)染力,，對(duì)RNA干擾敏感，常用作轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞和復(fù)制...
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