1. 每個(gè)時(shí)間點(diǎn)和每個(gè)樣品準(zhǔn)備 0.5 × 107 ~2 × 107 細(xì)胞,，每 0 .5 × 107 ~2 × 107 細(xì)胞用 2 ml 0.1~0.2 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸脈沖標(biāo)記 10~30 min （見基本方案步驟 1~4,，或見備擇方案 1 步驟 1~5）。

2. 去除 [35S] 甲硫氨酸的工作溶液,，用 10 ml 37℃ 的示蹤培養(yǎng)基洗一次,，并加入 10 ml 37℃ 的示蹤培養(yǎng)基。

3. 37℃ 培養(yǎng)到預(yù)期時(shí)間,。擰緊試管蓋子在旋轉(zhuǎn)情況下培養(yǎng)細(xì)胞懸液,。在 032 培養(yǎng)箱里孵育貼壁細(xì)胞。

4. 刮取貼壁細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到 15 ml 離心管,。收集刮取的細(xì)胞或細(xì)胞懸浮液于 4℃ 300 g 離心 5 min,。

5. 可選：通過 TCA 沉淀法測定標(biāo)記摻入的量（見輔助方案）,。

注意事項(xiàng)

1. 將2倍體積含有過量未標(biāo)記甲硫氨酸（15mg/L）的示蹤培養(yǎng)基直接加入到標(biāo)記混合物中,，能夠快速終止標(biāo)記反應(yīng)。

2. 示蹤≤2 h,，細(xì)胞懸液的最終濃度應(yīng)該是 2 × 106 細(xì)胞/ml,，或示蹤>2 h，用 0.5 × 106 細(xì)胞/ml,。對貼壁細(xì)胞而言,，加 10 ml/100 mm 平皿。

常見問題

1. 上清可以棄掉,，也可以收集起來用于分析分泌或脫落到培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì),。

2. 如果細(xì)胞沉淀不馬上使用的話，見基本方案步驟7,。

同實(shí)驗(yàn)其他方法

氨基酸代謝標(biāo)記實(shí)驗(yàn)

1. 室溫融化 [35S] 標(biāo)記甲硫氨酸,，并用預(yù)熱的（37℃）脈沖標(biāo)記培養(yǎng)基制備 0.1~0.2 mCi/ml 的工作溶液。2. 室溫下 300 g 離心 5 min,，獲得懸液中 0.5 × 107~

備擇方案 1 對貼壁細(xì)胞

1. 在 100 mm 組織培養(yǎng)皿中培養(yǎng)細(xì)胞到 80%~90% 融合（0.5 × 107~2 × 107 細(xì)胞,，取決于細(xì)胞類型）。2. 如上所述制備 [35S] 甲硫氨酸的工作液體（見基本方案步驟 1

備擇方案 3 長期細(xì)胞標(biāo)記

1. 在預(yù)熱的 37℃ 長期標(biāo)記培養(yǎng)基中制備 0.02～0.1 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸工作溶液（見基本方案步驟 1）,。2.1 對于懸浮細(xì)胞：用預(yù)熱的長期標(biāo)記培養(yǎng)基準(zhǔn)備并洗細(xì)胞一次

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安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究,、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn),、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑,；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù),；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品,；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL,、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品,。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè),。

備擇方案 2 示蹤標(biāo)記細(xì)胞

原理

材料與儀器

步驟

注意事項(xiàng)

常見問題

同實(shí)驗(yàn)其他方法

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