細 胞 聚 團 嚴(yán) 重 

經(jīng)傳代后嚴(yán)重聚團的293T細胞

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原因推斷：胰酶消化操作不當(dāng)導(dǎo)致細胞聚團。

• 消化過度或吹打過猛導(dǎo)致細胞受傷嚴(yán)重,，破損的細胞碎片容易粘連聚團,。

• 消化時細胞融合率太高,，成片脫落,，將不容易被吹散,，容易聚團,。

解決辦法：鑒于該細胞貼壁疏松，普通0.25%胰酶消化時間控制15s-30s,；吹打動作輕柔，控制在10-20次,；細胞融合率達到80%傳代即可傳代,，不可長的太滿,。

換血清批次后嚴(yán)重聚團的293T細胞

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原因推斷：血清來源于動物,，其組成成分有1000種左右,，且血清組成及含量常隨供血動物的年齡,、生理條件和營養(yǎng)條件而異,。每個批號的組分百分比含量都是不固定的,，所以批間差異是存在的,。293T細胞本身有聚團生長特性,，但嚴(yán)重聚團可能受到血清里的某些因子刺激,。

解決辦法：先用血清試用裝,，試用效果好,，可購買和血清試用裝批次相同的正裝,，囤積半年或一年的用量，有效避免批間差對細胞的影響（胎牛血清在-20℃保存可達5年）,。

 貼 壁 性 差 

貼壁疏松的293T細胞

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原因推斷：血清存在批間差異,，而293T細胞本身特點就是貼壁性差，對不同批次的血清適應(yīng)性不同,，就容易出現(xiàn)貼壁疏松現(xiàn)象,。

解決辦法：可適當(dāng)加高血清比例（最高不超過20%）,；建議試好一個血清批次多囤一些，可以避免血清批間差對細胞的影響,。

原因推斷：排除掉瓶和孔板本身材質(zhì)或TC（親水處理）處理因素外,，293T細胞貼壁性變差極有可能是因為空間的隔離導(dǎo)致細胞自分泌或旁分泌產(chǎn)生的信號分子濃度太低，不利于細胞的貼壁或增殖,。

解決辦法：在鋪板前,，對孔板進行明膠包被,，可有效促進細胞貼壁。

 轉(zhuǎn) 染 病 毒 后 細 胞 凋 亡 嚴(yán) 重 

經(jīng)病毒轉(zhuǎn)染后漂浮凋亡的293T細胞

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原因推斷：在排查了方法步驟和轉(zhuǎn)染試劑,，依然沒有改善的情況下,，可排查一下轉(zhuǎn)染前的營養(yǎng)體系，尤其是血清批間差帶來的影響,。很多同學(xué)說前期培養(yǎng)細胞形態(tài)正常呀，其實細胞形態(tài)學(xué)只是鑒別細胞是否健康的一個外在指標(biāo),，還要結(jié)合細胞其它指標(biāo)對細胞健康進行評定（比如倍增時間，存活率）,。

解決辦法：通過更換血清批次,，再進行轉(zhuǎn)染實驗并觀察轉(zhuǎn)染后的效果,，比較分析出原因。