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從96孔微培養(yǎng)板生長的哺乳動物細(xì)胞中分離DNA2021/12/20
原理本方案由Ramirez-solis等的方法1992,，1993改進(jìn)而成，是一種從微培養(yǎng)板的每個(gè)孔生長的真核細(xì)胞抽提基因組DNA的簡便有效的方法,。每個(gè)孔產(chǎn)生的基因組DNA足以做數(shù)次聚合酶鏈反應(yīng)（PCR...
CPB沉淀法純化放射性標(biāo)記的寡核苷酸實(shí)驗(yàn)2021/12/20
材料與儀器十六烷基溴化吡啶EDTA-TrisEDTA-Tris-DNA溶液乙醇-乙酸鈉溶液乙醇乙酸鈉TE(pH7.6)或適當(dāng)?shù)念A(yù)雜交液核酸和寡核苷酸純化的原料干冰乙醇浴步驟材料溶液和緩沖液稀釋貯存液至...
從大規(guī)模裂解物中制備λ噬菌體顆粒實(shí)驗(yàn)2021/12/20
原理從大規(guī)模培養(yǎng)物中制備的λ噬菌體,，可在高鹽存在下用聚乙二酵(PEG)沉淀的辦法從裂解物中回收得到。殘余的細(xì)胞碎片和PEG可用氯仿抽提,。在進(jìn)一步純化之前,，建議測定噬菌體制備物的得率。材料與儀器大腸桿菌...
cDNA文庫構(gòu)建2021/12/20
原理cDNA文庫是指某生物某發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄的全部mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而形成的克隆的集合,。經(jīng)典cDNA文庫構(gòu)建的基本原理是用Oligo(dT)作逆轉(zhuǎn)錄引物,，或者用隨機(jī)引物，給...
乙醇沉淀法2021/12/17
原理DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在,，當(dāng)加入乙醇時(shí),乙醇會奪DNA周圍的水分子,，使DNA失水而易于聚合。一般實(shí)驗(yàn)中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合,其乙醇的最終含量占67%左右,。因而也可改用...
測定用乙醇固定的 DNA 的含量2021/12/17
原理DNA和RNA在260nm處有一很高的吸收峰,，利用這個(gè)原理我們測其OD260，再推算出其濃度,。材料與儀器細(xì)胞樣品PBS緩沖液70%乙醇PI液離心機(jī)恒溫箱篩網(wǎng)步驟一,、培養(yǎng)細(xì)胞的DNA含量的測定制備單...
BSP克隆測序法2021/12/17
材料與儀器【材料】DNA目標(biāo)片段；【試劑】亞硫酸氫鹽,；步驟基因組DNA制備亞硫酸氫鹽修飾DNA純化與回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆測序注意事項(xiàng)1,、組織樣本：-20℃或-80℃低溫冰箱中保存，液氮或者干冰運(yùn)輸,；...
變性RNA在膜上的轉(zhuǎn)移和固定2021/12/17
原理多數(shù)情況下,，為檢測特定的靶mRNA，需先將RNA通過瓊脂糖電泳分離后，再從膠上轉(zhuǎn)移到二維支持物上,，（通常用尼龍膜),，再與持異的標(biāo)記探針雜交。正如在Nonhem雜交中討論的情況,，實(shí)驗(yàn)者可采用多種試劑...
哺乳動物 DNA 的快速分離2021/12/17
原理根據(jù)本方案制備的哺乳動物DNA約20~50kb,，適于作PCR反應(yīng)的模板。DNA產(chǎn)量在0.5到3.0μg/mg組織之間變化,，或者是5~15μg/300μl全血,。材料與儀器無DNase的RNase蛋白...
哺乳動物細(xì)胞抽提物中熒光素酶的測定實(shí)驗(yàn)2021/12/16
原理螢光素酶是理想的報(bào)告基因，因?yàn)椴溉閯游锛?xì)胞中不含內(nèi)源性螢光素酶,，一旦轉(zhuǎn)錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶,，同時(shí)在所有的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中，它的光產(chǎn)物具有最高的量子效率,，檢測靈敏度高,。熒光素酶報(bào)告基因被廣...
薄層層析法測定氯霉素?；D(zhuǎn)移酶含量實(shí)驗(yàn)2021/12/16
材料與儀器用攜帶感興趣DNA的pCAT載體轉(zhuǎn)染的哺乳動物培養(yǎng)細(xì)胞CAT反應(yīng)混合物1乙基乙酸裂解緩沖液不含鈣鹽和鎂鹽的磷酸鹽緩沖液薄層層析（TLC)溶劑Tris-Cl放射性墨水干冰乙醇浴不溶于乙醇的墨水...
BAL31 核酸酶消化法產(chǎn)生雙向缺失突變體實(shí)驗(yàn)2021/12/16
材料與儀器BAL31緩沖液EGTA乙醇酚氯仿醋酸鈉蔗糖凝膠上樣緩沖液TE噬菌體T4DNA聚合酶BAL31核酸酶大腸桿菌DNA聚合酶IKlenow片段限制性內(nèi)切酶瓊脂糖凝膠用于凝膠電泳的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)...
人生長激素的放射免疫分析法2021/12/16
材料與儀器hGH表達(dá)質(zhì)粒洗滌液親和素包被珠試管γ計(jì)數(shù)儀步驟1.取轉(zhuǎn)染了hGH表達(dá)質(zhì)粒的哺乳動物細(xì)胞的培養(yǎng)液100~500μl,。2.加100μl培養(yǎng)液或標(biāo)準(zhǔn)品至12mm×75mm圓底試管中。加入100μ...
CAT活性的相-抽提分析法2021/12/16
材料與儀器轉(zhuǎn)染細(xì)胞氯霉素Tris·ClTMPD二甲苯離心機(jī)離心管培養(yǎng)箱步驟一,、來源于哺乳動物細(xì)胞1.按“CAT活性的層析分析法”中的步驟1~5的凍融法,，制備哺乳動物細(xì)胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細(xì)...
含甲酰胺的測序膠2021/12/15
原理聚丙烯酰胺凝膠加人甲酰胺可以使造成條帶壓縮的測序產(chǎn)物的二級結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定,。材料與儀器DNA甲酰胺甲醇乙醇TEMEDSDS電泳儀步驟1.按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層,。2.按所需濃度配制甲酰胺凝膠...
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