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深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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輔助方案 TCA 沉淀測(cè)定標(biāo)記摻入量

時(shí)間：2022/3/10閱讀：1339
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原理

材料與儀器

被標(biāo)記的細(xì)胞懸液（見基本方案或備擇方案 1～4）
0.1％（m V）BSA／0.02%（m V）NaN3 10%TCA 溶液 冷凍乙醇
連接真空管道的濾過裝置 2.5 cm 玻璃微纖維濾膜（Whatman GF／C）

步驟

1. 加 10～20 μl 被標(biāo)記的細(xì)胞懸液到 0.1 ml 0.1％（m/V）BSA/0.02％（m/V）NaN3 中,，置于冰上,。


2. 加 1 ml 冷凍的 10％（m/V）TCA 溶液。劇烈振蕩混勻,，在冰上孵育 30 min,。


3. 在真空濾過裝置內(nèi)，濾過細(xì)胞懸液到 2.5 cm 玻璃微纖維濾膜上,。


4. 用 5ml 冷凍 10％TCA 溶液洗膜 2 次,，再用乙醇洗 2 次?？諝飧稍?30 min,。


5. 在玻璃微纖維濾膜上點(diǎn)同樣體積（見步驟 1，10～20 μl）的放射性標(biāo)記的細(xì)胞懸液,，在空氣中干燥,。


6. 轉(zhuǎn)移濾膜到 20 ml 閃爍管里，加 5 ml 閃爍記數(shù)溶液,，用閃爍記數(shù)儀測(cè)定放射活性,。


7. 計(jì)算 TCA 沉淀標(biāo)記（見步驟 4）與總放射活性的比值（見步驟 5）。

注意事項(xiàng)

１. TCA 有強(qiáng)烈腐蝕性,。在制備和操作 TCA 溶液時(shí)注意保護(hù)眼睛并避免皮膚接觸,。

2. 洗液應(yīng)按照混合化學(xué)/放射性廢棄物處理。根據(jù)安全規(guī)程進(jìn)行處理,。

常見問題

同實(shí)驗(yàn)其他方法

氨基酸代謝標(biāo)記實(shí)驗(yàn)

1. 室溫融化 [35S] 標(biāo)記甲硫氨酸,，并用預(yù)熱的（37℃）脈沖標(biāo)記培養(yǎng)基制備 0.1~0.2 mCi/ml 的工作溶液。2. 室溫下 300 g 離心 5 min,，獲得懸液中 0.5 × 107~

備擇方案 1 對(duì)貼壁細(xì)胞

1. 在 100 mm 組織培養(yǎng)皿中培養(yǎng)細(xì)胞到 80%~90% 融合（0.5 × 107~2 × 107 細(xì)胞,，取決于細(xì)胞類型）。2. 如上所述制備 [35S] 甲硫氨酸的工作液體（見基本方案步驟 1

備擇方案 2 示蹤標(biāo)記細(xì)胞

1. 每個(gè)時(shí)間點(diǎn)和每個(gè)樣品準(zhǔn)備 0.5 × 107 ~2 × 107 細(xì)胞,， 每 0 .5 × 107 ~2 × 107 細(xì)胞用 2 ml 0.1~0.2 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸脈沖標(biāo)記

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安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究,、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn),、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn),，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化,、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品,；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL,、對(duì)細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品,。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療,、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。


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