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如何優(yōu)雅地獲得漂亮小分子蛋白條帶2021/9/17
做過Western-Blot的童鞋知道,，分子量小于30KDa的蛋白分子不容易做,。小分子蛋白虐我千百遍,，我待小分子蛋白如初戀。抱怨是沒用的，想方設(shè)法解決問題才是正道。一次又一次的調(diào)整方案,，一次又一次的徒...
分享總結(jié)Western跑磷酸化蛋白的要點2021/9/17
抗體工欲善其事必先利其器，抗體很關(guān)鍵,。這里我們要說的并不是最貴的就是好的,，如果條件允許，建議同時購買不同廠家的抗體,，一起來試一試,，因為有時候即使是好的品牌，不同批次穩(wěn)定性也不一樣,?？贵w從訂購到到貨有一...
盤點RACE技術(shù)的幾種類型及特點2021/9/16
在分子生物學中，未知基因全長序列的獲取是研究新基因的重要步驟,。當我們不清楚目的基因的完整序列時,，獲得未知序列的方法有反向PCR、mRNA差異顯示技術(shù),、基因組減法技術(shù)以及cDNA文庫篩選技術(shù)等等.......
搞定內(nèi)參，駕馭 Western blot 已成功一半2021/9/15
westernblot對絕大多數(shù)實驗新人而言,，絕對是心中痛，一碰就要抓狂,。沒辦法,誰讓導師發(fā)話了,，WB做不好,，延畢就是分分鐘的事兒。這還真是讓小伙伴們感嘆道,，WB想說愛你不容易,。那么為了*馴服WB，獲...
用磷酸化抗體做Western Blot時，要注意哪些,？2021/9/15
今天給大家分享一下在用磷酸化抗體做WesternBlot時,，應該注意些什么。1.警惕內(nèi)部敵人一定要在lysisbuffer中加入蛋白酶抑制劑,，還要加入一定量的磷酸酶抑制劑,，因為組織或細胞裂解時會釋放出...
Western blot實驗結(jié)果分析2021/9/15
Westernblot實驗結(jié)果分析①微笑條帶解析：由于凝膠的中間部分凝固不均勻所致，多出現(xiàn)于較厚的凝膠處理辦法：配膠時一定要充分混勻,，待其充分凝固后再做后續(xù)試驗②帶出現(xiàn)紋理現(xiàn)象解析：樣品不溶性顆粒處理...
WB的免疫印跡操作分享2021/9/14
①膜處理（甲醇1min,，風干（放濾紙上），甲醇1min,，水1min）②封閉（用TBST配5%牛奶）1h配搖床③加一抗,，牛奶稀釋,所需濃度參考抗體說明書，看膜的大小配多少一抗,，4°過夜,。④室溫孵育20m...
WB過程中最重要的環(huán)節(jié)——轉(zhuǎn)膜2021/9/14
①跑到溴酚藍距離最下緣25px時配電轉(zhuǎn)液（tris3.03g，甘氨酸14.4g,，甲醇100ml,，定容至1L）②在電轉(zhuǎn)液中剝膠，裁膠,，剪膜,，膜活化（甲醇1min，去離子水1min,，電解液15min）③“...
WB電泳技巧分享2021/9/14
①清洗玻璃板,，去離子水沖，風干或烤干（一定要以處女座的精神去嚴格要求自己把板子洗干凈,，相當重要）②按說明書配膠,。先配下膠（分離膠），一般兩塊板配10ml的10%的膠（20~80kDa通用）膠的濃度根據(jù)...
蛋白樣品的制備與定量2021/9/14
（1）提細胞蛋白①消化或刮下細胞至1.5的EP管中,，標記,，10000r離心2min，PBS洗3遍②吸去EP管中PBS,，最好用濾紙吸干里面的水分,，加適量RIPA裂解液（RIPA裂解液：蛋白酶抑制劑=25...
三天征服Chip的經(jīng)驗分享2021/9/13
在科研界,，CHIP無疑是高冷的女神，在追逐的過程總是分分鐘虐得體無完膚,，糟心的實驗結(jié)果更是分分鐘想去“狗帶”,。征服CHIP的路上，有多虐心就有多少要注意的地方,。慶幸的是,，曾得到女神青睞的前輩們積累了不...
CO-IP沒有條帶的常見原因和解決的辦法2021/9/13
CO-IP并不容易做，尤其是兩個蛋白豐度低,，相互作用力較弱的時候,。做CO-IP經(jīng)常會遇到?jīng)]有條帶的問題。這里談談CO-IP沒有條帶的常見原因和解決的辦法,，更有獨門配方獻上,。蛋白濃度過稀絕大多數(shù)情況下，...
染色質(zhì)免疫共沉淀值得注意的15個細節(jié)2021/9/13
染色質(zhì)免疫共沉淀,，又叫Chip（ChromatinImmunoprecipitation）,。Chip又正好是英語里面薯片的意思。為了有趣,，就叫薯片實驗吧,。做薯片做了幾個月，時間不長,，但深刻體會到了魔鬼...
分享染色質(zhì)免疫共沉淀的方法2021/9/13
目前,，不斷發(fā)展的DNA和蛋白質(zhì)相互作用的方法和技術(shù)已經(jīng)成為研究DNA復制、重組,、修復和轉(zhuǎn)錄的核心,。今天跟大家分享的是花樣百出、拽酷炫的染色質(zhì)免疫共沉淀的方法,！染色質(zhì)免疫共沉淀(chromatinimm...
ELISA實驗操作中值得關(guān)注的細節(jié)大盤點2021/9/10
酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）因其具有敏感性高,、特異性強等優(yōu)點，被廣泛應用于臨床檢測中的各種抗原和抗體的測定,。盡管ELISA操作簡單,，但是小實驗里也蘊含著大文章，ELISA操作各個環(huán)節(jié)對實驗的檢測效果...
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