如何消化讓細胞生長的更好,，養(yǎng)細胞關(guān)鍵還是在消化,，以下介紹幾種細胞的消化方法

一,、酶消化法

1,、胰酶,，這是用得最多的,。一般濃度在0.25-0.5%。消化的時間根據(jù)細胞種類,、操作手法,，溫度等因素而變化，從幾分鐘到幾十分鐘不等,。0.25%的胰酶,，37℃一般在消化單層貼壁的細胞一般1-5分鐘就足夠了，用血清或者含血清的*培養(yǎng)基終止,。

2,、膠原酶，一般用于原代細胞消化,，這種方法作用溫和,，對細胞損傷較小，消化的時間也略長,，不推薦的原因是膠原酶有點小貴而且培養(yǎng)細胞株感覺沒有多大的必要,。

二、離子螯合劑

不破壞細胞表面分子,，僅與CAMs螯合,，因此，如果檢測細胞表面分子的話,，盡量,，甚至是一定不要用酶消化法。

1,、EDTA,，一般濃度在0.02%左右，使用它來消化細胞時,，注意它能顯著影響pH值,，而且在弱堿性條件下才易溶，而且它不能被終和,，因此,，消化下來的細胞一定要洗一遍。

三,、物理法

直接吹打或用細胞刮刀,，貼壁很牢的細胞可以使用這個方法，吹打和刮刀都會給細胞造成嚴重的損傷,，建議不到萬不得已不要使用此法,。

四、冷凍法

采用細胞冷凍后收縮的原理,，從而使細胞從培養(yǎng)瓶上脫落,。優(yōu)點：對細胞損傷小,，不需要中止或洗細胞，方便,，不需要另外配制消化液,。特別適用那些貼壁不是特別緊，又特別嬌氣的細胞,。缺點：細胞常成小片脫落,，重新鋪板后細胞生長會有點聚團。常用于間充質(zhì)干細胞,、DC細胞的消化,，具體過程是：1、用較多的4℃的PBS洗滌一遍細胞,，再加入適量的 4℃的PBS,，靜置操作臺上，很快細胞受冷皺縮小片脫落,，3,、輕輕吹打，細胞即*脫落,，4,、按一定比例傳代。

細胞消化難題：

1,，成團,、絮狀：

消化液里加入edta可以減少細胞成團的現(xiàn)象，血清可以終止胰酶的作用,，越好的血清使用的效價更高,，用胰酶消化后加血清終止，如果消化液中加入了edta的話,，就要將消化液倒干凈，如果細胞貼壁要求不是很嚴格的話,，一般不需要進行離心,。

比如說4T1細胞，這種細胞的貼壁能力天生很強,，用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化10~12min,。用PBS洗滌時要洗凈殘余的培養(yǎng)基，加入胰酶后在培養(yǎng)箱中消化(避免細胞室溫下受損以及在此溫度時胰酶活性*)至細胞收縮變圓(可顯微鏡下觀察)且有少許細胞脫落(呈流沙狀),，隨后立即棄去胰酶(如果脫落的細胞很多且需要大量細胞實驗,，則不能棄去胰酶)，加入培養(yǎng)基輕輕彈散(不能用無血清培養(yǎng)基或者PBS替代,，否則細胞聚集成團塊或絮狀),。

也可以用2%利多卡因消化5-8分鐘,，然后再棄去。

消化過度怎么辦,？

馬上用培養(yǎng)基中和,，收集全部的細胞到無菌的離心管中800RPM 3分鐘。棄上清,，用全培重懸,，換新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)，狀態(tài)不好的細胞在培養(yǎng)的過程中會死亡脫落,，在換液的時候可以清除掉,。