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細胞培養(yǎng)無小事——如何選擇血清,?

時間:2021/9/29閱讀:1278
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體外培養(yǎng)的細胞直接生活在培養(yǎng)基中,,因此培養(yǎng)基需要滿足細胞對營養(yǎng)成分,、促生長因子,、激素、滲透壓,、pH等諸多方面的要求,;原代提取的時候選擇如何選擇培養(yǎng)基成了關(guān)鍵的問題,此外在細胞提取的時候因血清可以模擬個體的生存環(huán)境,,在提取細胞的時候血清一定不可少,。

  維持細胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個方面:氨基酸,單糖,,維生素,,無機離子與微量元素,此外還有促生長激素,,滲透壓,,pH 值,并保證在配制試劑的時候無毒無污染,。

正常的培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基無非是基礎(chǔ)培養(yǎng)基加血清,。血清是一個神秘的試劑,至今為止,,它在細胞的生長繁殖發(fā)揮著重要甚至是難以替代的作用,。

血清的主要成分: 血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,,但還有一部分尚不清楚,,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡,、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異,。血清中含有各種血漿蛋白、多肽,、脂肪,、碳水化合物、生長因子,、激素,、無機物等。


  血清主要作用:提供基本營養(yǎng)物質(zhì):氨基酸,、維生素,、無機物、脂類物質(zhì),、核酸衍生物等,是細胞生長必須的物質(zhì),。

血清的判斷標準如下:好的血清應(yīng)該是透明清亮,,土黃色或棕黃色,,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠,。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁,、不透明、含許多沉淀物,,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性,;一般血清反復(fù)凍融或者有支原體污染的時候都會出現(xiàn)血清沉淀多的情況,若血清呈棕紅色,,說明血清中的血紅蛋白含量太高,,取材時有溶血現(xiàn)象;如果搖晃時感覺液體稀薄,,說明血清中摻入的生理鹽水太多,。如果要進一步了解血清的質(zhì)量,則應(yīng)連續(xù)培養(yǎng)某些細胞,,觀察細胞生長狀況,。


  質(zhì)量一般的血清在使用的時候建議滅活,即56℃30分鐘,,主要是為了防止血清中的補體成分對細胞產(chǎn)生毒性,,一般的血清不需要滅活,因為加熱也會導(dǎo)致一些刺激因子和蛋白的流失,,不利于細胞的生長,。

  血清一般儲存于-20℃,同時應(yīng)避免反復(fù)凍融,。反復(fù)凍融會導(dǎo)致血清中的蛋白釋出,,從而會沉淀增多,購買大包裝的血清后,,首先要滅活處理,,然后分裝成小包裝,儲存于-20℃,,使用前4度慢融,。不同批次的血清會有很大的差異性,為了實驗統(tǒng)一和可重復(fù)性,,建議購買血清之前先索取試用裝進行測試,,選定一批后就要保留足夠使用6個月至1年的量,直至用另一批經(jīng)過預(yù)先試驗的樣品代替,。


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