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體外培養(yǎng)的細(xì)胞直接生活在培養(yǎng)基中,,因此培養(yǎng)基需要滿(mǎn)足細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分,、促生長(zhǎng)因子,、激素,、滲透壓、pH等諸多方面的要求,;原代提取的時(shí)候選擇如何選擇培養(yǎng)基成了關(guān)鍵的問(wèn)題,,此外在細(xì)胞提取的時(shí)候因血清可以模擬個(gè)體的生存環(huán)境,在提取細(xì)胞的時(shí)候血清一定不可少,。
維持細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)條件一般包括以下幾個(gè)方面:氨基酸,,單糖,維生素,,無(wú)機(jī)離子與微量元素,,此外還有促生長(zhǎng)激素,滲透壓,,pH 值,,并保證在配制試劑的時(shí)候無(wú)毒無(wú)污染。
正常的培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基無(wú)非是基礎(chǔ)培養(yǎng)基加血清,。血清是一個(gè)神秘的試劑,,至今為止,它在細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖發(fā)揮著重要甚至是難以替代的作用,。
血清的主要成分: 血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,,且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e,、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異,。血清中含有各種血漿蛋白,、多肽,、脂肪、碳水化合物,、生長(zhǎng)因子,、激素、無(wú)機(jī)物等,。
血清主要作用:提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):氨基酸,、維生素、無(wú)機(jī)物,、脂類(lèi)物質(zhì),、核酸衍生物等,是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì),。
血清的判斷標(biāo)準(zhǔn)如下:好的血清應(yīng)該是透明清亮,,土黃色或棕黃色,無(wú)沉淀或極少沉淀,,比較粘稠,。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁、不透明,、含許多沉淀物,,說(shuō)明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;一般血清反復(fù)凍融或者有支原體污染的時(shí)候都會(huì)出現(xiàn)血清沉淀多的情況,,若血清呈棕紅色,,說(shuō)明血清中的血紅蛋白含量太高,取材時(shí)有溶血現(xiàn)象,;如果搖晃時(shí)感覺(jué)液體稀薄,,說(shuō)明血清中摻入的生理鹽水太多。如果要進(jìn)一步了解血清的質(zhì)量,,則應(yīng)連續(xù)培養(yǎng)某些細(xì)胞,,觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。
質(zhì)量一般的血清在使用的時(shí)候建議滅活,,即56℃30分鐘,,主要是為了防止血清中的補(bǔ)體成分對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性,一般的血清不需要滅活,,因?yàn)榧訜嵋矔?huì)導(dǎo)致一些刺激因子和蛋白的流失,,不利于細(xì)胞的生長(zhǎng)。
血清一般儲(chǔ)存于-20℃,,同時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融,。反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致血清中的蛋白釋出,從而會(huì)沉淀增多,,購(gòu)買(mǎi)大包裝的血清后,,首先要滅活處理,,然后分裝成小包裝,儲(chǔ)存于-20℃,,使用前4度慢融,。不同批次的血清會(huì)有很大的差異性,為了實(shí)驗(yàn)統(tǒng)一和可重復(fù)性,,建議購(gòu)買(mǎi)血清之前先索取試用裝進(jìn)行測(cè)試,,選定一批后就要保留足夠使用6個(gè)月至1年的量,直至用另一批經(jīng)過(guò)預(yù)先試驗(yàn)的樣品代替,。
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