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DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：脈沖場(chǎng)凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：脈沖場(chǎng)凝膠脈沖場(chǎng)凝膠電泳是在兩個(gè)不同方向的電場(chǎng)周期性交替進(jìn)行的,，可分離長(zhǎng)至5Mb的DNA分子，其工作原理是DNA分子在交替變換方向的電場(chǎng)中作出反應(yīng)所需的時(shí)間取決于它的大小,。較小的分子重新定向較快,，因而在凝膠中移動(dòng)也較快，于是不同大小的分子被成功分離。實(shí)驗(yàn)方法倒轉(zhuǎn)電場(chǎng)實(shí)驗(yàn)材料DNA試劑、試劑盒GTBETBE瓊脂糖儀器,、耗材電泳儀實(shí)驗(yàn)步驟1.制備用于水平電泳的1%瓊脂糖凝膠，放入電泳裝置,，其上覆蓋以2~3mm的GTBE或TBE緩沖液,。2.加入液體樣品。裝好蠕動(dòng)泵用于電泳緩沖液循環(huán),。3.對(duì)于微型 -
DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：細(xì)菌中制備基因組DNA實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：細(xì)菌基因DNA真核生物的一切有核細(xì)胞（包括培養(yǎng)細(xì)胞）都能用來(lái)制備基因組DNA。真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細(xì)胞核內(nèi),，因此,，制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質(zhì)、脂類和糖類等分離,，又要保持DNA分子的完整,。實(shí)驗(yàn)方法小量制備氯化銫法實(shí)驗(yàn)方法原理提取DNA的一般過(guò)程是將分散好的組織細(xì)胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白質(zhì)，再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質(zhì),，得到的DNA溶液經(jīng)乙醇沉淀使DNA從溶液中析出,。實(shí)驗(yàn)材料細(xì)菌試劑、試劑盒TE氯化銫溴化乙錠NaCl乙醇C -
DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：植物組織制備基因組DNA實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：植物組織基因DNA利用基因組DNA較長(zhǎng)的特性,，可以將其與細(xì)胞器或質(zhì)粒等小分子DNA分離,。在提取過(guò)程中，染色體會(huì)發(fā)生機(jī)械斷裂,，產(chǎn)生大小不同的片段,，因此分離基因組DNA時(shí)應(yīng)盡量在溫和的條件下操作，如盡量減少酚/氯仿抽提,、混勻過(guò)程要輕緩,，以保證得到較長(zhǎng)的DNA。實(shí)驗(yàn)方法氯化銫法CTAB法實(shí)驗(yàn)方法原理加入一定量的異丙醇或乙醇,，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團(tuán)飄浮其中,，可用玻棒將其取出,，而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部,，從而達(dá)到提取的目的,。實(shí)驗(yàn)材料植物組織試劑,、試劑盒抽提緩沖液 -
DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：哺乳動(dòng)物中制備基因組DNA實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：哺乳動(dòng)物基因DNA在DNA提取過(guò)程中應(yīng)盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性,，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ),。一般真核細(xì)胞基因組DNA有107-9bp，可以從新鮮組織,、培養(yǎng)細(xì)胞或低溫保存的組織細(xì)胞中提取,，常是采用在EDTA以及SDS等試劑存在下用蛋白酶K消化細(xì)胞，隨后用酚抽提而實(shí)現(xiàn)的,。實(shí)驗(yàn)方法制備DNA實(shí)驗(yàn)材料動(dòng)物組織試劑,、試劑盒PBS乙酸銨乙醇酚氯仿異戊醇TE儀器、耗材離心機(jī)搖床研缽實(shí)驗(yàn)步驟1.切下組織并立即剪成小塊,，置于液氮中凍結(jié),。2.將200mg~1g的組織用預(yù)冷的研缽和研 -
DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：大腸桿菌質(zhì)粒DNA 的提?。▔A裂解法）
此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切PCR擴(kuò)增,。1.取1.5ml細(xì)菌培養(yǎng)物于EP管中，4000rpm離心1分鐘,，棄上清液,，使細(xì)菌沉淀盡量干燥；2.將細(xì)菌沉淀重懸于用冰預(yù)冷的100μl溶液I（50mmol/L葡萄糖,，10mmol/LEDTApH8.0,，25mmol/LTris-HClpH8.0）中，劇烈振蕩,；3.加入200μl新配制的溶液II（0.2mol/LNaOH,，1％SDS（m/v）），蓋緊EP管口,，快速顛倒離心管5次,，以混合混合物，確保離心管的整個(gè)內(nèi)表面與溶液II -
DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：SSR標(biāo)記實(shí)驗(yàn)步驟
一,、簡(jiǎn)介：SSR簡(jiǎn)單序列重復(fù)標(biāo)記（Simplesequencerepeat,簡(jiǎn)稱SSR標(biāo)記），也叫微衛(wèi)星序列重復(fù),，是由一類由幾個(gè)核苷酸（1-5個(gè)）為重復(fù)單位組成的長(zhǎng)達(dá)幾十個(gè)核苷酸的重復(fù)序列,，長(zhǎng)度較短，廣泛分布在染色體上,。由于重復(fù)單位的次數(shù)的不同或重復(fù)程度的不*相同,，造成了SSR長(zhǎng)度的高度變異性，由此而產(chǎn)生SSR標(biāo)記或SSLP標(biāo)記。雖然SSR在基因組上的位置不盡相同,，但是其兩端序列多是保守的單拷貝序列,，因此可以用微衛(wèi)星區(qū)域特定順序設(shè)計(jì)成對(duì)引物，通過(guò)PCR技術(shù),，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳,，即可顯示SSR位 -
DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：凍融法回收DNA片段操作步驟
1.紫外燈下仔細(xì)切下含待回收DNA的膠條，將切下的膠條（小于0.6g）搗碎,，置于1.5ml離心管中,；2.加入等體積的Tris-HCl飽和酚（pH7.6），振蕩混勻,；3.-20℃放置5-10min,；4.4℃離心10000g×5min，上層液轉(zhuǎn)移置另一離心管中,；5.加入1/4體積H2O于含膠的離心管中,，振蕩混勻；6.-20℃,，放置5-10min,；7.4℃離心10000g×5min，合并上清液,；8.用等體積酚/氯仿,、氯仿分別抽提一次，取上清,；9.加入1/10體積3MNaAc（pH5.2）、2.5倍體積 -
DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù),，DNA 序列分析技術(shù)
物種的遺傳多樣性在本質(zhì)上是DNA一級(jí)序列的多樣性。近年來(lái),，隨著DNA測(cè)序技術(shù)的迅速發(fā)展和日益普及,，DNA測(cè)序在遺傳多樣性的研究中正在起著越來(lái)越大的作用。本章將介紹目前在遺傳多樣性研究中常用的一種手動(dòng)和一種全自動(dòng)雙鏈DNA測(cè)序方法,。1DNA模板的制備在遺傳多樣性的研究中,，由于樣本量一般都較龐大，因而DNA測(cè)序的速度就成了很關(guān)鍵的因素,。因此,，這類研究中常常直接測(cè)定純化的PCR雙鏈產(chǎn)物而不大采用克隆技術(shù)。本節(jié)介紹本實(shí)驗(yàn)室常用的從PCR產(chǎn)物制備測(cè)序模板的方法,，即低熔點(diǎn)膠回收法,。（1）制備1.5％～2.0
