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利用基因組DNA較長(zhǎng)的特性,，可以將其與細(xì)胞器或質(zhì)粒等小分子DNA分離,。在提取過程中,，染色體會(huì)發(fā)生機(jī)械斷裂，產(chǎn)生大小不同的片段,，因此分離基因組DNA時(shí)應(yīng)盡量在溫和的條件下操作,，如盡量減少酚/氯仿抽提、混勻過程要輕緩,， 以保證得到較長(zhǎng)的DNA,。
實(shí)驗(yàn)方法
- 氯化銫法
- CTAB法
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團(tuán)飄浮其中,， 可用玻棒將其取出,，而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部， 從而達(dá)到提取的目的,。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 植物組織 |
| 試劑,、試劑盒 | 抽提緩沖液 十二烷基肌氨酸鈉 TE 異丙醇 溴化乙錠 氯化銫 |
| 儀器、耗材 | 離心機(jī) |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 1. 收取10~50 g 新鮮的植物組織,。 2. 植物組織用冷的無菌水洗滌,、吸干，放人液氮中凍結(jié),，用研缽和研杵研成細(xì)粉,。 3. 將凍結(jié)的細(xì)粉放入250 ml 的離心瓶中，立即加入抽提緩沖液約每克植物5~10 ml,，輕輕攪拌混勻,。 4. 加入十二烷基肌氨酸鈉使終濃度達(dá)1%，于溫育1~2 h,。 5. 用JA-14轉(zhuǎn)子4℃,，5 500 g 離心10min 保留上清，必要時(shí)重復(fù)此歩驟以除去殘?jiān)?br /> 6. 加人0.6體積異丙醇,，混合,，如果看不見沉淀，于-20℃放置30 min,，用JA-14轉(zhuǎn)子4℃,，7 500 g 離心15 min，棄上清,。 7. 沉淀用9 ml TE緩沖液重懸,，加入9.7 g 固體氯化銫，混勻,，冰上放置30 min,，用JA-14轉(zhuǎn)子，7 500 g 離心10 min，保留上清,。 8. 加入0.5 ml 10 mg/ml 的溴化乙錠,，冰上放置30 min，4℃ 7500 g 離心10min. 9. 將上清轉(zhuǎn)入兩個(gè)5 ml 的快封超離心管中,，并封口,。 10. 用VTi80轉(zhuǎn)子20℃ 525 000 g 離心4 h,，或20℃,，300 000 g 離心，用15號(hào)針頭和注射器收集帶,。 11. 用氯化艷飽和的異丙醇重復(fù)抽提DNA以除去溴化乙錠,。 12. 加入2體積水和6體積100%乙醇，混勻,，-20℃放置1 h,，用JA-20或JA-21轉(zhuǎn)子4℃，7500 g 離心10 min,。 13. 沉淀用TE緩沖液重懸,，加入1/10體積的3 mol/l 乙酸鈉和2體積的100%乙酵重懸，重復(fù)離心,。 14. 沉淀晾干后用TE緩沖液重懸 |
