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2015年
09月 -
實驗試劑生理鹽水（或PBS）弗氏*佐劑（Freund’scompleteadjuvant,，F(xiàn)CA）弗氏不*佐劑（Freund’sincompleteadjuvant,，F(xiàn)IA）二甲苯，酒精棉，脫脂棉,，2%NaN3實驗設備剪刀（剪兔毛用）一把,、彎頭眼科手術鑷子（游離血管用）一把,、直頭眼科手術剪（剪血管用）一把,，手術刀架,，手術刀片，注射器（1ml,、10ml,，25ml）附針頭，兔子固定架,，滅菌三角燒瓶（200ml）或平皿（直徑18cm）,、彎頭止血鉗四把，直頭止血鉗兩把,，手術縫合線,，塑料放血管，紗布等,。實【查看全文】
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2015年
09月 -
實驗原理分子生物研究中,，zui常用的探針即為雙鏈DNA探針，它廣泛應用于轉基因植物拷貝數(shù)的鑒定,、臨床診斷等方面,。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機引物合成法。切口平移法(nicktranslation)當雙鏈DNA分子的一條鏈上產生切口時,E.coliDNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端,。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸,。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'端補上核苷酸,從而使切口沿著DNA鏈移動,用放射性核苷酸代替原先無放【查看全文】
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2015年
09月 -
實驗原理線粒體是細胞內一種重要細胞器，是細胞進行呼吸作用的場所,。細胞的各項活動所需要的能量,，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的?；铙w染色是應用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯示活細胞內某些結構而又很少影響細胞生命活動的一種染色方法,。詹納斯綠B是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍綠色,，而在周圍的細胞質中染料被還原,，成為無色狀態(tài)。實驗試劑1.l／300詹納斯綠B染液2.Ringer氏液(哺乳類用)實驗設備1.顯微鏡2.手術器材一套3.解剖盤4.小平皿5.載片6.蓋片7【查看全文】
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2013年
10月 -
DNA段的克隆需要合適的載體,，載體或是質粒,，或是噬菌體，或是病毒,，通常大多經過人工改造[地的,。作為載體必須具備兩條件：一是該載體在細胞內必須能自主復制，即必須具備復制原點,；二是該載體必須具備適合的酶切位點,，且這些酶切位點不在復制原點區(qū)域內,。以上兩條，保證了載體的可繁殖性和可利用性,。為了便于獲得陽隆克隆,，載體上常有篩選標記，如對抗菌素的抗性,，某些基因產物的顯色反應等,。一、質粒常用的有pBR322,，pUC系列質粒等。（一）pBR322質粒是4362bp的環(huán)狀雙鏈DNA載體,，有2個抗藥性基因（四環(huán)素和【查看全文】
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2013年
10月 -
早期的基因組DNA甲基化分析技術,，如SssI甲基轉移酶分析法、氯乙醛反應法,、免疫學抗體技術等,，已經不能滿足現(xiàn)代表觀遺傳學研究的需求。今年來常用的基因組甲基化的方法有以下兩種,。1.甲基化敏感擴增多態(tài)性實驗甲基化敏感擴增多態(tài)性實驗技術被用于檢測雙向型真菌的DNA甲基化,，它是在擴增片段長度多態(tài)性技術的基礎上建立起來、基本程序是：提取高質量的基因組DNA,，分別用EcoRⅠ/HpaⅡ,，EcoRⅠ/MspⅠ兩種酶組合對基因組DNA進行雙酶切，并連上相應的限制性內切酶的接頭,，然后以接頭序列設計的預擴增引物,，進【查看全文】
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2013年
10月 -
基因突變是遺傳物質分子結構的改變，包括在DNA分子編碼區(qū)的密碼子和密碼閱讀框的改變,?；蛲蛔兛梢园l(fā)生在體細胞，也可以發(fā)生在生殖細胞中,，這兩種突變有*不同的后果,。發(fā)生于生殖細胞中的基因突變可以遺傳給后代。發(fā)生于機體其他組織細胞中基因突變的體細胞突變,，可以引起發(fā)生突變個體的形態(tài)或生理上的變異,，只能通過無性生殖的形式傳遞給后代，而不能通過有性生殖遺傳下去（在胚胎細胞發(fā)育時期出現(xiàn)的情況例外）,。1．突變的稀有性基因突變的稀有性是指在正常情況下,，突變率（mutationrate）往往是很低的。所謂突變率是指【查看全文】
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2013年
10月 -
從組織中獲取DNA難嗎,？不難,，真不難,。高一就有開設的從雞血中獲取DNA的生物實驗課，很簡單的幾步就可以得到DNA,。但要想獲取高質量的DNA,，尤其是從一些富含多糖、多酚,、淀粉,、纖維和蛋白的組織，后面用于酶切,、高通量測序大片段文庫的構建,還是有一定的難度的,。zui近協(xié)助北京農業(yè)生物技術研究中心一個老師提取桃葉片DNA還是遇到了一些困難，因為老師要做桃的個體重測序,，因此對DNA的要求還是非常高的,。之前跟其他很多老師交流植物DNA的提取，大多數(shù)目前仍然使用CTAB法,，有些老師購買試劑盒進行提取,，其實很多【查看全文】
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2013年
10月 -
1、PCR產物測序時出現(xiàn)重疊峰問題圖1（模板中有堿基缺失,，往往是單一位點（1-1）或兩個位點（1-2）堿基缺失導致測序結果移碼）圖1-1圖1-2解決方法：將PCR產物克隆到質粒（如T載體）中挑單克隆測序,，或將PCR產物進行PAGE純化（至少瓊脂糖充分電泳后切膠純化）后再進行測序。問題圖2（PCR產物不純,，含部分序列一致的兩種以上的片段,，長度不一）圖2解決方法：主要原因是PCR產物沒有純化，含有部分序列一致的兩種以上長度不一的片段,，將PCR產物進行PAGE純化（至少瓊脂糖充分電泳后切膠純化）后再進【查看全文】
