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實(shí)驗(yàn)試劑
生理鹽水（或PBS）
弗氏*佐劑（Freund’s complete adjuvant，F(xiàn)CA）
弗氏不*佐劑（Freund’s incomplete adjuvant,， FIA）
二甲苯,，酒精棉，脫脂棉,，2% NaN3
實(shí)驗(yàn)設(shè)備
剪刀（剪兔毛用）一把、彎頭眼科手術(shù)鑷子（游離血管用）一把、直頭眼科手術(shù)剪（剪血管用）一把,，手術(shù)刀架，手術(shù)刀片,，注射器（1ml,、10ml，25ml）附針頭,，兔子固定架,，滅菌三角燒瓶（200ml）或平皿（直徑18cm）、彎頭止血鉗四把,，直頭止血鉗兩把,，手術(shù)縫合線，塑料放血管,，紗布等,。
實(shí)驗(yàn)材料
1. 免疫原：蛋白或KLH偶聯(lián)的多肽。每次免疫100-200μg免疫原,。
2. 兔子的選擇,，兔子的重量應(yīng)在四斤以上，兩耳光滑,，明顯可見耳靜,、動(dòng)脈，健康,。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 免疫
用生理鹽水稀釋免疫原,，然后與相應(yīng)的佐劑進(jìn)行1:1混合?？乖妥魟?混合形成穩(wěn)定的乳劑,，將該乳劑在兔子雙肩周圍的皮膚下進(jìn)行皮下注射和后大腿進(jìn)行肌肉注射。每個(gè)區(qū)域大約用1/4的免疫原,。這樣免疫原可以持久存在從而提高免疫應(yīng)答,。
注：
抗原注射以前需要收集一些正常血清，已備檢測抗體時(shí)作為陰性對照,。待兔子在新環(huán)境中穩(wěn)定,，大概需要四天左右時(shí)間，可以進(jìn)行耳動(dòng)脈取血,。取血量約5ml足矣,。
免疫用的抗原必須純化,，否則影響抗體的質(zhì)量?？乖?jīng)FCA或FIA充分乳化后才能注射,。將抗原液與佐劑等比例混合后，置于混合器上使之劇烈振蕩使抗原充分乳化,，乳化過程比較費(fèi)時(shí),、費(fèi)力，但若乳化不充分,，會(huì)影響免疫的效果,，振蕩后，1000rpm離心一分鐘,，如水相和油相不分層即可注射,。免疫用FCA，以后都用FIA,。
免疫方法可采用背部多點(diǎn)注射法,。即于家兔脊柱兩旁選4-6點(diǎn)皮下注射，每點(diǎn)注0.1ml,，間隔2周后再于上述部位選不同點(diǎn)注射（不要選擇臨近位點(diǎn),，否則潰瘍愈合不好）。每次免疫的抗原量約100μg,。免疫次數(shù)在四五次即可，抗原用量大可以減少次數(shù),。
2. 取血
免疫一周后,，可以耳動(dòng)脈取血檢測抗體效價(jià)。因?yàn)槠鸪鯉状蚊庖弋a(chǎn)生的抗體的效價(jià)比較低,，頭兩次取血,，夠檢測用即可。在三次免疫后,，可以獲得較價(jià)的抗體,，每次取血量可以在40ml，不要取太多,，否則會(huì)造成兔子貧血,。
前幾次取血用19號針頭對兔子進(jìn)行耳動(dòng)脈取血，室溫過析出血清,。
zui后一次取血可以采用頸動(dòng)脈放血,，具體操作如下：
1) 家兔仰臥于兔架上固定頭部，用紗布固定四肢,。頭部略放低以暴露頸部,。剃毛并消毒皮膚,。
2) 沿頸部中線用手術(shù)刀切開皮膚約10cm，分離皮下結(jié)締組織,，直至暴露出氣管兩側(cè)的胸鎖乳突?。ㄐ⌒牟僮鳎缗龅叫⊙艹鲅?，可用止血鉗止血）,。
3) 用直頭止血鉗分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區(qū)疏松組織，暴露出頸總動(dòng)脈后用彎頭眼科鑷使之游離,，剝離神經(jīng)和結(jié)締組織,。
4) 于動(dòng)脈下套入兩根黑絲線，分別置于遠(yuǎn)心及近心端,。結(jié)扎遠(yuǎn)心端的絲線,。近心端的動(dòng)脈用血管夾夾住。
5) 用小拇指墊在血管下,，用尖頭眼科手術(shù)剪在兩根絲線間的動(dòng)脈璧上剪一小口（勿剪斷）,，插入塑料放血管。再將近心端的絲線結(jié)扎固定于放血管上,，以防放血管滑脫,。
6) 松開止血鉗，使血液流入容器中,。一般一只家兔可放血100-120ml,。
3. 血清的分離
如果用三角瓶或平皿盛血，將器皿傾斜放置于37oC烘箱2hr,，轉(zhuǎn)移到4oC沉淀過,，第二天早上用吸管吸取血清。如果用離心管收集,，37oC烘箱放置2hr,，轉(zhuǎn)移到4oC沉淀過，第二天早上離心,，10000RCF,，10分鐘。在血清中加入NaN3至終濃度0.02%,，分裝后-20oC保存,。
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