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02 2013年 08月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：區(qū)域特異性誘變實(shí)驗(yàn)

標(biāo)簽：區(qū)域特異性誘變可在長(zhǎng)達(dá)3‘的克隆化DN段上產(chǎn)生大量的隨機(jī)分布的核苷酸替換突變，在將DNA克隆到一個(gè)可用來分離單鏈DNA的載體后,，用各種可造成特定堿基損傷的化學(xué)試劑處理,。實(shí)驗(yàn)方法基本方案實(shí)驗(yàn)材料DNA試劑、試劑盒乙酸鈉亞硝酸鈉TE無水乙醇dNTP反轉(zhuǎn)錄酶RNA酶洗脫液溴化乙錠儀器,、耗材水浴鍋培養(yǎng)箱實(shí)驗(yàn)步驟1.用限制性內(nèi)切核酸酶消化DNA以獲得目的DN段，將靶片段雙向克隆到M13噬菌體載體或含有M13復(fù)制起始子的質(zhì)粒載體中,。從100ml感染細(xì)抱培養(yǎng)物中提取單鏈DNA,。2.在三個(gè)微量離心管內(nèi)各加
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02 2013年 08月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：SNP實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

一,、原理SNP（SingleNucleotidePolymorphism）即單核苷酸多態(tài)性，是由于單個(gè)核苷酸改變而導(dǎo)致的核酸序列多態(tài)性（Polymorphism）,。據(jù)估計(jì),，在人類基因組中，大約每千個(gè)堿基中有一個(gè)SNP,，無論是比較于限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）分析還是微衛(wèi)星標(biāo)記（STR）,，都要廣泛得多。SNP是我們考察遺傳變異的zui小單位,據(jù)估計(jì),，人類的所有群體中大約存在一千萬個(gè)SNP位點(diǎn),。一般認(rèn)為，相鄰的SNPs傾向于一起遺傳給后代,。于是,，我們把位于染色體上某一區(qū)域的一組相關(guān)聯(lián)的SNP等位
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02 2013年 08月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：甲醛變性電泳檢測(cè)RNA完整性

一、材料,、試劑和儀器1,、材料：植物總RNA5-10μg2、試劑：1）加樣運(yùn)載緩沖液（Loadingbuffer）50%甘油1mmol/LEDTA（pH8.0）0.25%溴酚藍(lán)25%二甲苯氰FF2）10×TAEBuffer3）5×甲醛凝膠電泳緩沖液：0.1mol/LMOPs（pH7.0）40mmol/L乙酸鈉5mmol/LDETA（pH8.0）4）甲醛,，甲酰胺3,、儀器：電泳裝置，紫外透射觀測(cè)儀二,、實(shí)驗(yàn)程序1,、甲醛變性的瓊脂糖（Agarose）凝膠的配制在250mL的錐形瓶中準(zhǔn)確稱量2gAgaros
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27 2013年 07月: DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：多藥抗藥基因的表達(dá)實(shí)驗(yàn)

多藥抗藥基因的表達(dá)實(shí)驗(yàn)標(biāo)簽：抗藥基因多藥抗藥基因的表達(dá)實(shí)驗(yàn)是通過反轉(zhuǎn)錄和PCR的方法來檢測(cè)特定基因的過度表達(dá)。實(shí)驗(yàn)方法PCR擴(kuò)增法實(shí)驗(yàn)方法原理大多MDR細(xì)胞膜上出現(xiàn)MDR-1基因及其基因產(chǎn)物P-糖蛋白過度表達(dá),。實(shí)驗(yàn)材料RNA試劑,、試劑盒PBS氯仿異丙醇萘酸異硫氰酸肽十二烷基肌酸鈉構(gòu)櫞酸鈉乙酸鈉二疏基乙醇乙醇Taq酶儀器、耗材離心機(jī)紫外分光光度計(jì)瓊脂糖凝膠電泳PCR儀實(shí)驗(yàn)步驟一,、細(xì)胞總RNA提取1.收集約5×107個(gè)細(xì)胞,，冷PBS洗滌。2.加入400ulRNA提取液（含6mol/l的異硫氰酸肽,，0
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27 2013年 07月: DNA專題：質(zhì)粒DNA提取及瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)

一,、堿變性法提取質(zhì)粒DNA質(zhì)粒（Plasmid）是細(xì)菌染色體外能自身獨(dú)立復(fù)制的雙股環(huán)狀DNA。帶有遺傳信息,，可賦予細(xì)菌某些新的表型,。將質(zhì)粒指紋圖譜分析方法、質(zhì)粒DNA探針技術(shù)及檢測(cè)質(zhì)粒的PCR技術(shù)用于臨床感染性疾病的診斷和流行病學(xué)調(diào)查已成為現(xiàn)實(shí),。質(zhì)粒作為載體在基因工程中起著重要的作用,。分離和純化質(zhì)粒DNA的方法很多,，但這些方法基本包括三個(gè)步驟：即細(xì)菌的培養(yǎng)和質(zhì)粒DNA的擴(kuò)增，細(xì)菌菌體的裂解,；質(zhì)粒DNA的提取與純化,。本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)用堿變性方法提取質(zhì)粒DNA。原理細(xì)菌培養(yǎng)物加入SDS和NaOH堿性溶液處
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27 2013年 07月: DNA專題：真核細(xì)胞基因組提取

一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康募氨尘案叩葎?dòng)物,，高等植物的基因組相當(dāng)龐大,，如人類細(xì)胞基因組由30億個(gè)堿基對(duì)組成，果蠅基因組有1.4×108個(gè)堿基對(duì),，水稻基因組有1.4×109個(gè)堿基對(duì),。真核細(xì)胞基因組中,，約1萬－1.5萬個(gè)可表達(dá)的結(jié)構(gòu)基因,，其它大量存在的是調(diào)控序列和內(nèi)含子序列?？梢哉f某特定物種的基因組,，包含了該物種生長(zhǎng)，發(fā)育,，繁殖等各項(xiàng)生理活動(dòng)的幾乎全部信息量,，因而對(duì)真核細(xì)胞基因組的結(jié)構(gòu)，組成,，以及表達(dá)調(diào)控的研究是至關(guān)重要的,，而研究的起點(diǎn)就是要獲得純度高--不含蛋白質(zhì)、糖類,、酚,、氯仿等污染；得率好--以便有足夠量用于
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22 2013年 07月: DNA專題：DNA定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)

本文先講zui簡(jiǎn)單的一個(gè)點(diǎn)的定點(diǎn)突變技術(shù),，其它較長(zhǎng)片段的突變,，刪除，插入技術(shù)以后會(huì)慢慢奉上：在做實(shí)驗(yàn)之前,，我們首先要搞清楚實(shí)驗(yàn)的目的和實(shí)驗(yàn)的原理,。實(shí)驗(yàn)的目的應(yīng)該比較明確吧：就是要把自己的基因上面的一個(gè)堿基換成另外一個(gè)堿基。一般情況下我們會(huì)有幾種可能使我們需要這樣去做：*我們吊出來的基因有點(diǎn)突變,，相信這可能是大家經(jīng)常會(huì)遇到的問題,。基因好不容易吊出來,，并裝進(jìn)了自己的載體,，卻發(fā)現(xiàn)有一兩個(gè)堿基跟自己的預(yù)期序列或所有的公共數(shù)據(jù)庫(kù)不匹配，然后暴昏,。大家實(shí)驗(yàn)室里面還是用Taq酶為主吧,，Pfu這樣的高保真酶大家
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22 2013年 07月: DNA專題：血基因組DNA提取實(shí)驗(yàn)

血基因組DNA提取可以：（1）從凍全血、血漿、血清,、骨髓,、其他體液、淋巴細(xì)胞,、培養(yǎng)細(xì)胞,、病毒和線粒體中提取DNA；（2）用于后續(xù)測(cè)序,、遺傳信息學(xué)等研究,。實(shí)驗(yàn)方法血基因組DNA試劑盒提取法血基因組DNA大量試劑盒提取法血基因組DNA中量試劑盒提取法實(shí)驗(yàn)方法原理本試劑盒采用特殊的細(xì)胞裂解和蛋白去除液（包括蛋白酶K裂解）從抗凝全血中得到基因組DNA。適用于從凍全血,、血漿,、血清、骨髓,、其他體液,、淋巴細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞,、病毒和線粒體中提取DNA,。實(shí)驗(yàn)材料抗凝全血試劑、試劑盒血基因組DNA試劑盒儀器,、耗材96孔
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