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RNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：TRIzol RNA提取方法
TRIzolRNA提取試劑盒是由GIBCOBRL公司推出提取RNA的產(chǎn)品,，其操作方便、快捷,。在TRIzol中,，RNA是隔離在RNA酶污染之外的。而對(duì)樣品的后續(xù)操作會(huì)要求用無(wú)RNA酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿,。玻璃器皿可以在150°C的烘箱中烘烤4小時(shí),。塑料器皿可以在0.5MNaOH中浸泡10分鐘，用水*漂洗干凈后高壓滅菌備用,。（一）試劑準(zhǔn)備1．TRIzol試劑,。2．氯仿3．異丙醇4．75%乙醇（DEPCH2O配制）5．DEPCH2O（二）操作步驟1．樣品處理：（1）培養(yǎng)細(xì)胞：收獲細(xì)胞1-5× -
DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：質(zhì)粒DNA限制性酶切圖譜分析
一、DNA的限制性酶切實(shí)驗(yàn)原理核酸限制性內(nèi)切酶是一類能識(shí)別雙鏈ＤＮＡ中特定堿基順序的核酸水解酶,，這些酶都是從原核生物中發(fā)現(xiàn),，它們的功能猶似高等功物的免疫系統(tǒng)，用于抗擊外來(lái)ＤＮＡ的侵襲,。限制性內(nèi)切酶以內(nèi)切方式水解核酸鏈中的磷酸二酯鍵,，產(chǎn)生的ＤＮＡ段５’端為Ｐ,，３’端為ＯＨ,。1.限制性內(nèi)切酶的類型根據(jù)限制酶的識(shí)別切割特性，催化條件及是否具有修飾酶活性可分為Ⅰ,、Ⅱ,、Ⅲ型三大類。*類（I型）限制性內(nèi)切酶能識(shí)別專一的核苷酸順序,，它們?cè)谧R(shí)別位點(diǎn)很遠(yuǎn)的地方任意切割DNA鏈,，但是切割的核苷酸順序沒(méi)有專一性，是隨 -
相關(guān)專題引物設(shè)計(jì)載體名稱上游引物（5'primer）下游引物（3'primer）P3*FLAG-CMVCMV-30（825-854）CMV-24（1129-1152）pAc5.1/V5-His（_A,_B,_C）pAc5-5BGHrevpAcG2TpGEX-5notavailablepACTT7EEVT3/EBVrevpACT2GAL4ADforpGAL4-ADrvpACT2p17110p12584pACYC184（BamHI-site）PBRforBamPBRrevBampAC
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【DNA原位雜交技術(shù)】 熒光原位雜交（FISH）探針的制備及其應(yīng)用
zui近有一些戰(zhàn)友對(duì)熒光原位雜交技術(shù)比較感興趣,，我整理了相關(guān)資料和自己的心得,，和大家交流一下。不妥之處,，請(qǐng)大家指出,，共同討論學(xué)習(xí)。內(nèi)容分三部分：一,、概述1.克隆性染色體異常是腫瘤的特征2.染色體異常常見(jiàn)的類型3.染色體異常的檢測(cè)方法二,、熒光原位雜交及其探針1.熒光原位雜交的原理2.熒光原位雜交的探針三,、熒光原位雜交探針的制備和熒光原位雜交（按試驗(yàn)流程介紹）一、概述1.克隆性染色體異常是腫瘤的特征1914年德國(guó)遺傳學(xué)家Boveri就提出染色體畸變與腫瘤起源相關(guān),，然而這還僅僅只是一個(gè)假說(shuō),；1960年 -
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)系列：飼料,、飲水及飼養(yǎng)環(huán)境
做動(dòng)物實(shí)驗(yàn),，zui先要做的事情就是要養(yǎng)好動(dòng)物。掌握好動(dòng)物飼料,、飲水及其生活環(huán)境,，這對(duì)于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的成功是zui基本的保證。這是看似一個(gè)平常,，但卻有著不少細(xì)節(jié)的問(wèn)題,。為了本版廣大站友能在整體上提高對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)的認(rèn)識(shí)，做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的*步,，特此開(kāi)設(shè)本貼討論動(dòng)物飼養(yǎng)的問(wèn)題,。希望大家能踴躍參與，以更多的實(shí)例來(lái)充實(shí),、豐富本貼,。擬分以下幾個(gè)方面來(lái)討論：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇概述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物如何辨雌雄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的適應(yīng)性飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼料（普通飼料、特殊飼料）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飲水實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的籠具實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的墊料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)環(huán)境實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 -
DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：變性聚丙烯酰胺凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：變性聚丙烯酰胺凝膠電泳本方法由于快捷,、簡(jiǎn)便及具髙分離度，對(duì)純化寡核苷酸非常有用,。盡管得到率偏低（＜50%）,，回收的量通常卻大大超過(guò)了大多數(shù)分子生物學(xué)應(yīng)用所需的量步驟亦可用于分離小RNA或其他單鏈多聚核苷酸。實(shí)驗(yàn)方法基本方法實(shí)驗(yàn)材料核苷酸試劑,、試劑盒濃氨水TBE丙烯酰胺亞甲雙丙烯酰胺TEMED尿素過(guò)硫酸銨TE儀器,、耗材真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀電泳儀實(shí)驗(yàn)步驟1.用濃氨水將合成的寡核苷脧從可控孔度玻璃拄上洗脫下來(lái)。于55℃加熱5h以上,。2.樣品移至離心管中,，在Speedvac真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中凍干，沉淀用0 -
DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：DNA印跡雜交分析實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：DNA印跡雜交雜交分析的原理是特定序列的單鏈DNA分子（即通常標(biāo)記的“探計(jì)”）可與另一個(gè)固定了的具有互補(bǔ)序列（“靶”序列）的DNA分子或RNA分子形成堿基配對(duì),，雜交分子的穩(wěn)定性取決于發(fā)生堿基配對(duì)的程度,，這一技術(shù)可檢測(cè)復(fù)雜基因組中的單拷貝基因。實(shí)驗(yàn)方法放射標(biāo)記法實(shí)驗(yàn)方法原理本方案適合于用100~1000bp長(zhǎng)的放射性標(biāo)記的DNA探針對(duì)Southern轉(zhuǎn)印,、斑點(diǎn)及狹線印跡進(jìn)行雜交分析,。實(shí)驗(yàn)材料DNA試劑、試劑盒SDSSSC儀器,、耗材水浴鍋培養(yǎng)箱實(shí)驗(yàn)步驟1.用6×SSC潤(rùn)濕帶有固定了的DNA的膜 -
DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：Southern 印跡實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：Southern印跡Southern印跡法是將DNA段從電泳凝膠中轉(zhuǎn)移至膜支持物上,，使DNA段固定,，因此該膜半*性地重現(xiàn)出凝膠電泳的帶型。實(shí)驗(yàn)方法印跡法堿性緩沖液法向下毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法電轉(zhuǎn)印法實(shí)驗(yàn)方法原理本方案是專門(mén)為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設(shè)計(jì)的,，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法,。實(shí)驗(yàn)材料DNA試劑、試劑盒HClNaClTrisNaOHSSC溴化乙錠儀器,、耗材電泳儀紫外透射儀實(shí)驗(yàn)步驟一,、向上毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法的轉(zhuǎn)移疊層系統(tǒng)：圖一、向上毛細(xì)管轉(zhuǎn)移法的轉(zhuǎn)移疊層系統(tǒng),，A表示海
