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感受態(tài)制備：農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)
農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)標(biāo)簽：農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備植物轉(zhuǎn)基因農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備可以：（1）用于建立農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系；（2）用于農(nóng)桿菌表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建,；（3）用于農(nóng)桿菌其他分子生物學(xué)研究,。實(shí)驗(yàn)方法氯化鈣法電轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌感受態(tài)實(shí)驗(yàn)方法原理在基因工程操作中，感受態(tài)細(xì)胞的制備和質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化是一項(xiàng)基本技術(shù),。感受態(tài)是細(xì)菌細(xì)胞具有的能夠接受外源DNA的一種特殊生理狀態(tài),。農(nóng)桿菌的感受態(tài)可用CaCl2處理而誘導(dǎo)產(chǎn)生。將正在生長的農(nóng)桿菌細(xì)胞加入到低滲的CaCl2溶液中,，0℃下處理便會使細(xì)菌細(xì)胞膜的透性發(fā)生改變，此時(shí)的細(xì)胞呈現(xiàn) -
感受態(tài)制備：農(nóng)桿菌感受態(tài)的制備和轉(zhuǎn)化
雙元載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化1.1農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備1.1.1.取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml鏈霉素平板劃線,，28℃培養(yǎng),。1.1.2.挑取單菌落接種于5mlYM液體培養(yǎng)基中，220rpm28℃振蕩培養(yǎng)12-16hr,。1.1.3.取2ml菌液轉(zhuǎn)接于100mlYM液體培養(yǎng)基中,，28℃220rpm振蕩培養(yǎng)至OD600=0.5。1.1.4.轉(zhuǎn)入無菌離心管,，5000rpm離心5min,去上清液,。1.1.5.加入10ml預(yù)冷的0.1M的CaCl2溶液，輕輕懸浮細(xì)胞,，冰上放置20min,。4℃500 -
感受態(tài)制備：酵母感受態(tài)細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：酵母感受態(tài)細(xì)胞制備酵母感受態(tài)細(xì)胞制備可以：（1）用于建立酵母轉(zhuǎn)化體系；（2）用于酵母表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建,；（3）用于酵母其他分子生物學(xué)研究,。實(shí)驗(yàn)方法化學(xué)法試劑盒制備法實(shí)驗(yàn)材料釀酒酵母試劑、試劑盒YPDA液體培養(yǎng)基蒸餾水甘油二甲基亞砜儀器,、耗材培養(yǎng)皿離心機(jī)離心管冰箱實(shí)驗(yàn)步驟一,、試劑與耗材1.試劑細(xì)菌用-酵母提取物（Fisher）、細(xì)菌用-蛋白胨（Fisher）,、葡萄糖（Fisher）,、細(xì)菌用-瓊脂粉,、去離子水、甘油（Sigma）,、二甲基亞砜（Sigma）,、聚乙二醇3350（Sigma）、醋酸鋰（Si -
感受態(tài)制備：枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備可以：（1）用于建立枯草芽孢桿菌轉(zhuǎn)化體系,；（2）用于其基因改造,；（3）用于提高枯草芽孢桿菌生產(chǎn)性能相關(guān)研究。實(shí)驗(yàn)方法化學(xué)法化學(xué)改進(jìn)法實(shí)驗(yàn)材料枯草芽孢桿菌168試劑,、試劑盒SPI培養(yǎng)基EGTASPII培養(yǎng)基檸檬酸鈉EGTA氫氧化鈉KH2PO4K2HPO4MgCl2MgSO4葡萄糖酵母膏（NH4）2SO4儀器,、耗材培養(yǎng)箱培養(yǎng)皿錐形瓶紫外分光光度計(jì)接種環(huán)離心管實(shí)驗(yàn)步驟一、試劑配制1.SP鹽0.2%（NH4）2SO4,，1.4%K2HPO4,，0. -
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的幾個(gè)實(shí)驗(yàn)方法
摘要：本實(shí)驗(yàn)介紹了脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的幾個(gè)方法。實(shí)驗(yàn)原理脂質(zhì)體（LR）試劑是陽離子脂質(zhì)體DOTMA和DOPE的混合物（1：1）,。它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中,，是目前條件下zui方面的轉(zhuǎn)染方法之一。轉(zhuǎn)染率高,，優(yōu)于磷酸鈣法,，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉(zhuǎn)染到各種細(xì)胞,。用LR進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí),，首先需要優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，應(yīng)找出該批LR對轉(zhuǎn)染某一特定細(xì)胞適合的用量,、作用時(shí)間等,，對每批LR都要做。先要固定一個(gè)DNA的量和DNA/LR混合物與細(xì)胞相互作用的時(shí)間,，DNA可從1-5ug和孵育時(shí)間6h,，開始， -
一,、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的主要方法——脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染,。了解外源基因進(jìn)入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達(dá)（綠色熒光蛋白）,，為染色準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料,。二、實(shí)驗(yàn)原理上圖所示是脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的示意圖,，它顯示了外源質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞的一般過程,。外源基因進(jìn)入細(xì)胞主要有四種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導(dǎo)法和病毒介導(dǎo)法,。電擊法是在細(xì)胞上短時(shí)間暫時(shí)性的穿孔讓外源質(zhì)粒進(jìn)入,；磷酸鈣法和脂質(zhì)體法是利用不同的載體物質(zhì)攜帶質(zhì)粒通過直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因進(jìn)入細(xì)胞,；病毒法是利用包裝了外源基因的病毒感染
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感受態(tài)制備：大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備,、重組DNA的轉(zhuǎn)化、克隆篩選
1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵笸ㄟ^本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞和外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入受體菌細(xì)胞的技術(shù)以及篩選轉(zhuǎn)化體的技術(shù),。了解細(xì)胞轉(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學(xué)研究中的意義,。2.相關(guān)知識及原理感受態(tài)細(xì)胞（Competentcells）：受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化學(xué)試劑法）的處理后,，細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化,，成為能容許多有外源DNA的載體分子通過的感受態(tài)細(xì)胞（competentcell）。轉(zhuǎn)化（transformation）：是將異源DNA分子引入一細(xì)胞株系,，使受體細(xì)胞獲得新的 -
RNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：核糖核酸酶保護(hù)分析
一,、體外轉(zhuǎn)錄在無菌1.5ml微型離心管中,，結(jié)合以下內(nèi)容：4ul5倍轉(zhuǎn)錄緩沖液2ul0.1MDTT4ul2.5MMNTP（A，C,，G）0.8ulRNA酶抑制劑（25U/ul）RNA酶抑制劑（Promega）中100UM冷UTP1ul/ugUL線性DNA模板5ul10UCI/ULP32UTP（800Ci/mmol）1ulRNA聚合酶SP6,，T7或T3總體積?20ul。孵育1小時(shí),，37℃,。2ul每個(gè)轉(zhuǎn)錄的DNA酶I，孵育20分鐘,，37℃。二,、探頭凈化凈化探頭使用QIAGEN公司的QIAquick核苷酸
