聯(lián)系電話
上海北諾生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員·14年
- 聯(lián)系人：
- 周經(jīng)理 劉經(jīng)理
- 電話：
- 021-57730393
- 手機(jī)：
- 15800960770
- 傳真：
- 86-021-61496710
- 地址：
- 上海市徐匯區(qū)宜山路520號(hào)中華門大廈18樓D座
- 個(gè)性化：
- www.bnbiotech.com
- 網(wǎng)址：
- www.bnbiotech.com
掃一掃訪問手機(jī)商鋪
-
PCR技術(shù)專題：免疫PCR系列三-基本實(shí)驗(yàn)步驟
主要程序（1）抗原+生物素化抗體→抗原-生物素化抗體復(fù)合物,；（2）加親合素→抗原-生物素化抗體-親合素復(fù)合物；（3）加生物素化DNA→抗原-生物素化抗體-親合素-生物素化DNA,；（4）PCR擴(kuò)增生物素化DNA部分。實(shí)驗(yàn)步驟（1）制備生物素化DNA將噬粒BLuescriptskt,用生物素標(biāo)記的M13引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增制備出含T3和T7引物序列的280bpDNa段,，即為生物素化DNA,。（2）免疫PCR模式1.試劑包被緩沖液：20mmol/LTris-HCI（pH9.5），含150mmol/LNaC -
PCR技術(shù)專題：PCR擴(kuò)增分離目的DNA段實(shí)驗(yàn)原理,、材料和步驟
一、目的了解多聚合酶鏈反應(yīng)DNA擴(kuò)增技術(shù)的基本原理和實(shí)驗(yàn)應(yīng)用,，掌握PCR反應(yīng)基本技術(shù),。二、原理PCR（PolymeraseChainReaction）即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是1986年由KallisMullis發(fā)現(xiàn),。這項(xiàng)技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于分子生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域,，它不僅可用于基因分離克隆和核酸序列分析，還可用于突變體和重組體的構(gòu)建,，基因表達(dá)調(diào)控的研究,，基因多態(tài)性的分析,，遺傳病和傳染病診斷，腫瘤機(jī)制探查,，法醫(yī)鑒定等方面,。PCR技術(shù)已成為方法學(xué)上的一次革命,，它必將大大推動(dòng)分子生物學(xué)各學(xué)科的研究發(fā)展,。PCR是一種 -
PCR產(chǎn)物克隆大致分為兩類,，即平頭連接和粘頭連接,。平頭連接是將制備好的平頭載體和補(bǔ)平或削平的PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行連接。載體可用EcoRV或SmaI切成平頭,；PCR產(chǎn)物純化后,，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用該酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求不高,，PCR產(chǎn)物也可不加處理,。如果使用Stratagene公司的pfuDNA聚合酶或NewEnglandBiolabs公司的VentDNA聚合酶，這兩種酶有5’→3’校對(duì)能力,，擴(kuò)增出來的PCR產(chǎn)物已經(jīng)是平頭,，可以
-
PCR技術(shù)專題：反向PCR （inverse-PCR）實(shí)驗(yàn)步驟
inverse-PCR是克隆插入片段側(cè)翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假陽性太多,，而Inverse-PCR一般只要有特異條帶,，基本上就是目的片段?；静襟E如下：1,、反向PCR（InversePCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位點(diǎn)側(cè)翼DNA序列非常有效的方法。a.選擇合適的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn),。并在T-DNA的邊界（左邊界,、右邊界均可）和酶切位點(diǎn)附近設(shè)計(jì)引物P1、P2,；b.回收DNA,，T4連接酶連接，使酶切后的DNA段環(huán)化,；c.回收連接后的DNA,，用引物P1、P2做PCR,，就 -
菌落PCR標(biāo)簽：菌落PCR菌落PCR（ColonyPCR）可不必提取基因組DNA,，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,，省時(shí)少力,。建議使用載體上的通用引物,。通常利用此方法進(jìn)行重組體的篩選或者DNA測序分析。zui后的PCR產(chǎn)物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小,。實(shí)驗(yàn)方法基本方案實(shí)驗(yàn)方法原理直接挑取菌落進(jìn)行PCR,，PCR的95℃加熱可以破胞，釋放基因組DNA或質(zhì)粒,，成為PCR體系的模板,，然后進(jìn)行鏈?zhǔn)綌U(kuò)增。實(shí)驗(yàn)材料基因樣品試劑,、試劑盒dNTPPCR混合液儀器,、耗材PC
-
巢式PCR標(biāo)簽：巢式PCR巢式PCR是一種變異的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），使用兩對(duì)（而非一對(duì)）PCR引物擴(kuò)增完整的片段,。*對(duì)PCR引物擴(kuò)增片段和普通PCR相似,。第二對(duì)引物稱為巢式引物（因?yàn)樗麄冊?次PCR擴(kuò)增片段的內(nèi)部）結(jié)合在*次PCR產(chǎn)物內(nèi)部，使得第二次PCR擴(kuò)增片段短于*次擴(kuò)增,。實(shí)驗(yàn)方法基本方案實(shí)驗(yàn)方法原理由于巢式PCR反應(yīng)有兩次PCR擴(kuò)增,，從而降低了擴(kuò)增多個(gè)靶位點(diǎn)的可能性（因?yàn)榕c兩套引物都互補(bǔ)的引物很少）增加了檢測的敏感性；又有兩對(duì)PCR引物與檢測模板的配對(duì),，增加了檢測的可靠性,。由于第二套引
-
PCR技術(shù)專題：限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分析
本實(shí)驗(yàn)將應(yīng)用RFLP分析技術(shù)檢測NMDA受體中的GRIN2A亞基基因3號(hào)內(nèi)含子中的2個(gè)SNP位點(diǎn)rs17750303（A→C）和rs837690（A→G）。[實(shí)驗(yàn)原理]DNA限制性內(nèi)切酶具有識(shí)別特定的DNA序列并在特定的部位切斷DNA雙鏈的活性功能,，DNA分子由于突變（核苷酸的置換,、插入或缺失）改變（或形成）了限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列，使DNA限制性內(nèi)切酶不能（或可以）將靶DN段切斷,，電泳檢測時(shí),，存在相應(yīng)DNA限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列者原DNA片段變成短片段；不存在相應(yīng)DNA限制性內(nèi)切酶識(shí)別序列者原DN -
PCR方法操作簡便,，靈敏度高,，可檢測出少至0.1pg的目的DNA。目前已廣泛應(yīng)用于多種病原微生物的檢測,。乙肝病毒（HBV）感染引起的乙型肝炎,，在我國發(fā)病率很高，而且HBV與肝硬化,、原發(fā)性肝癌關(guān)系密切,，因此，HBV的診斷極為重要,。PCR檢測HBV-DNA敏感性明顯高于傳統(tǒng)的血清學(xué)方法,，且能顯示HBV在體內(nèi)復(fù)制情況，直接反映患者血液的感染性,，并對(duì)模棱兩可的或與臨床表現(xiàn)不符的血清學(xué)結(jié)果,，PCR技術(shù)有助于明確診斷,。【材料】待檢血清,、HBV-PCR反應(yīng)液20管（20μl/管）,、HBV-DNA裂解液、陽性模
