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【原理】瓊脂糖（agarose）是經(jīng)過挑選，以質(zhì)地較純的瓊脂（agar）作為原料而制成的。瓊脂在化學(xué)上是由瓊脂糖和瓊脂膠組成的復(fù)合物,。瓊脂膠是一含有硫酸根和羥基的多糖，它具有離子交換性質(zhì),，這種性質(zhì)會(huì)給電泳及凝膠過濾以不良的影響,。瓊脂糖是直鏈多糖,，它由D－半乳糖和3,6－脫水－L－半乳糖的殘基交替排列組成,。瓊脂糖主要通過氫鍵而形成凝膠,。電泳時(shí)因凝膠含水量大（98－99%），近似自由電泳,，因?yàn)楣腆w支持物的影響少,，故電泳速度快，區(qū)帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團(tuán),，電滲影響很少,，是一種較好的電泳材
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蛋白質(zhì)技術(shù)專題：血漿游離血紅蛋白測(cè)定
實(shí)驗(yàn)原理血紅蛋白具有類過氧化物酶活性，可催化H2O2釋放新生態(tài)氧,，使鄰甲聯(lián)苯胺氧化發(fā)生顏色變化,，由無色zui終變?yōu)樗{(lán)紫色。根據(jù)顯色深淺與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較,，可測(cè)出其含量,。實(shí)驗(yàn)方法材料：1．2g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液2．1%H2O23．10%醋酸溶液4．分光光度計(jì)方法：1.抽取靜脈血2-3ml，枸櫞酸鈉抗凝,，離心分離血漿。2．按下表進(jìn)行操作,，用分光光度計(jì),，波長(zhǎng)為530nm，以空白管調(diào)零,，測(cè)定測(cè)定管的吸光度,。試劑（ml）測(cè)定管空白管2g/L鄰甲聯(lián)苯胺溶液0.50.5患者血漿0.02/1%H2O20.50.5混 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：血紅蛋白電泳（hemoglobin electrophoresis）
實(shí)驗(yàn)原理血紅蛋白電泳（hemoglobinelectrophoresis）目的是檢出和確認(rèn)各種正常和異常的血紅蛋白。根據(jù)不同的血紅蛋白帶有不同的電荷,，等電點(diǎn)不同,，在一定的pH緩沖液中，血紅蛋白的等電點(diǎn)小于緩沖液的pH時(shí)帶負(fù)電荷,，電泳時(shí)在電場(chǎng)中向陽極泳動(dòng),，反之，Hb帶正電荷向陰極泳動(dòng),。在一定電壓下,，經(jīng)過一定時(shí)間的電泳，不同的血紅蛋白所帶電荷不同,，分子量不同,，其泳動(dòng)方向和速度不同，可分離出各自的區(qū)帶,，同時(shí)對(duì)電泳出的各區(qū)帶進(jìn)行比色或電泳掃描,，可進(jìn)行各種血紅蛋白的定量分析。一般zui常用的是pH8.6醋 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)外源蛋白的表達(dá)
[實(shí)驗(yàn)原理]SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中zui經(jīng)常使用的一種方法,。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱,，使蛋白變性，多肽鏈內(nèi)部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原,，肽鏈被打開,。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結(jié)合而帶負(fù)電荷，電泳時(shí)在電場(chǎng)作用下，肽鏈在凝膠中向正極遷移,。不同的大小的肽鏈由于在遷移時(shí)受到的阻力不同,，在遷移過程中逐漸分開，其相對(duì)遷移率與分子量的對(duì)數(shù)間成線形關(guān)系,。pGLO是將綠色熒光蛋白（GFP）的基因克隆在阿拉伯糖啟動(dòng)子之后的一種表達(dá) -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度
（一）原理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制,，因此可以形成“連續(xù)系統(tǒng)”和“不連續(xù)系統(tǒng)”兩種電泳系統(tǒng)?！安贿B續(xù)系統(tǒng)”zui大的特點(diǎn)在于大大提高了樣品分離的分辨率,。這種電泳的主要特點(diǎn)是：（1）使用兩種不同濃度的凝膠系統(tǒng)；（2）配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同,，并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分,、pH也不相同。在實(shí)驗(yàn)中,，電泳凝膠分為兩層：上層膠為低濃度的大孔膠,，稱為濃縮膠或成層膠，配制此層膠的緩沖液是Tris-HCl,，pH6.7,；下層膠則是高濃度的小孔膠，稱為分離膠或電泳膠,，成膠的緩沖液是Tris -
蛋白質(zhì)在細(xì)菌中表現(xiàn)后,，以反復(fù)的冷凍-解凍方法打破細(xì)胞，再用硫酸銨把蛋白質(zhì)沉淀下來,，此步驟可以去除大部份核酸,、多醣、脂質(zhì)等雜物,。儀器用具：恒溫震蕩培養(yǎng)箱37℃,；高速冷凍離心機(jī)及離心管（使用20,000rpm離心陀）使用高速離心機(jī)要注意：離心機(jī)及離心陀的溫度要預(yù)冷*，相對(duì)位置的兩只離心管要平衡好,，離心陀轉(zhuǎn)速不能超過zui高速限,；液態(tài)氮及冰筒；37℃溫水浴藥品試劑：轉(zhuǎn)型菌株pQG11/M15[pREP]單一菌落,；LB/amp/kan及IPTG（1Mstock）,；Lysisbuffer（50mMNa3P
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蛋白質(zhì)技術(shù)專題：folin—酚試劑法（lowry法）測(cè)蛋白質(zhì)含量
一、實(shí)驗(yàn)原理這種蛋白質(zhì)測(cè)定法是zui靈敏的方法之一,。過去此法是應(yīng)用zui廣泛的一種方法,，由于其試劑乙的配制較為困難（現(xiàn)在已可以訂購），近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代,。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,，只是加入了第二種試劑，即folin—酚試劑，以增加顯色量,，從而提高了檢測(cè)蛋白質(zhì)的靈敏度,。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深蘭色的原因是：在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物,。folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原,，產(chǎn)生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下,， -
一,、原理1.葡聚糖凝膠SephadexG-200凝膠柱層析利用大分子不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部zui先流出柱外，而小分子物質(zhì)進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部,，流速慢而zui后流出柱外,，凝膠層析法能將不同分子大小的物質(zhì)分離開。（G-200能分離800-80000D分子量的蛋白質(zhì)）2.利用離子交換法,，選取DEAE-陰離子纖維素DE52柱材料,，因?yàn)镻PO是帶有陽離子的蛋白質(zhì)，在層析時(shí)會(huì)吸附在柱材料上,，而雜蛋白會(huì)洗下。后用NaCl梯度洗脫P(yáng)PO,，（NaCl為強(qiáng)離子交換劑,，能將弱吸附在柱材料上的PPO置換下來）。粗酶液從而得到
