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生物化學(xué)技術(shù)專題：微生物的糖發(fā)酵
一,、單糖發(fā)酵試驗(yàn)(一)、實(shí)驗(yàn)原理單糖發(fā)酵是將葡萄糖,，乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi),，使其zui終濃度為0.75~1％,。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管，制成單糖發(fā)酵管,，接種細(xì)菌經(jīng)37℃培養(yǎng)18~24小時,，若能分解糖產(chǎn)酸則酚紅指示劑由紅變黃，若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成,，小倒管內(nèi)則聚集有氣泡,；不分解，則指示劑不變色,。(二),、實(shí)驗(yàn)材料1．菌種：大腸桿菌，傷寒桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物,。2．培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵管,，乳糖發(fā)酵管等。(三)實(shí)驗(yàn)方法1．將傷寒桿菌,，大腸桿菌按照液體接種方法分 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：細(xì)胞凋亡的幾種檢測方法
一,、形態(tài)學(xué)觀察方法1、HE染色,、光鏡觀察：凋亡細(xì)胞呈圓形,，胞核深染,，胞質(zhì)濃縮，染色質(zhì)成團(tuán)塊狀,，細(xì)胞表面有“出芽”現(xiàn)象,。2、丫啶橙(AO)染色,，熒光顯微鏡觀察：活細(xì)胞核呈黃綠色熒光,，胞質(zhì)呈紅色熒光。凋亡細(xì)胞核染色質(zhì)呈黃綠色濃聚在核膜內(nèi)側(cè),，可見細(xì)胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體,。3、臺盼藍(lán)染色：如果細(xì)胞膜不完整,、破裂,，臺盼藍(lán)染料進(jìn)入細(xì)胞，細(xì)胞變藍(lán),，即為壞死,。如果細(xì)胞膜完整，細(xì)胞不為臺盼藍(lán)染色,，則為正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞,。此方法對反映細(xì)胞膜的完整性，區(qū)別壞死細(xì)胞有一定的幫助,。4,、透射電鏡觀察：可見凋亡細(xì)胞表面微絨 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：核蛋白的免疫熒光定位實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：核蛋白免疫熒光定位免疫熒光技術(shù)又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展zui早的一種免疫熒光技術(shù),。它是在免疫學(xué),、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。實(shí)驗(yàn)方法免疫熒光定位法實(shí)驗(yàn)方法原理免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是采用熒光素標(biāo)記的已知抗體（或抗原）作為探針,，檢測待測組織,、細(xì)胞標(biāo)本中的靶抗原（或抗體），形成的抗原抗體復(fù)合物帶有熒光素,，在熒光顯微鏡下,，由于受高壓汞燈光源的紫外光照射，熒光素發(fā)出明亮的熒光,，這樣就可以分辨出抗原（或抗體）的所在位置及其性質(zhì),，并可利用熒光定量技術(shù)計(jì)算抗原的含量，以達(dá) -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：ELISA的操作要點(diǎn)
的試劑,，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件,。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn),。本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點(diǎn),，珠式,、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用,，兩者均有詳細(xì)的使用說明,，嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果,。一,、標(biāo)本的采取和保存可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）,、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份,。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定（如血 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：凝膠過濾層析實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：凝膠過濾層析凝膠過濾層析（gelfiltrationchromatography）法又稱排阻層析或分子篩方法,，主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和形狀，即蛋白質(zhì)的質(zhì)量進(jìn)行分離和純化,。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì),，多是交聯(lián)的聚糖類物質(zhì)，使蛋白質(zhì)混合物中的物質(zhì)按分子大小的不同進(jìn)行分離,。實(shí)驗(yàn)方法蛋白質(zhì)的凝膠過濾分離實(shí)驗(yàn)材料蛋白質(zhì)試劑,、試劑盒凝膠過濾緩沖液儀器、耗材布氏漏斗凝膠過濾層析柱分光光度計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟1.如果凝膠過濾的介質(zhì)是干粉,，則需在凝膠過濾緩沖液中*溶脹,。2.在遠(yuǎn)離過往通道及直接光照的恒 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：蛋白質(zhì)的電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)很多膜可作為蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移的固相支持物，如重氮化纖維素膜（DPT,，DBM）,、DEAE-纖維素膜、尼龍膜等,，但用的zui多的還是硝酸纖維素膜（NC膜）,，該膜與蛋白質(zhì)以非共價(jià)的疏水作用形式結(jié)合，結(jié)合能力約為80μg/cm2,。實(shí)驗(yàn)方法基本方案實(shí)驗(yàn)材料蛋白質(zhì)試劑,、試劑盒轉(zhuǎn)移緩沖液甲醇電極緩沖液儀器、耗材電轉(zhuǎn)移槽電泳儀實(shí)驗(yàn)步驟1.剪6塊3MM濾紙和一塊NC膜,。2.將剪好的3MM濾紙和NC膜在轉(zhuǎn)移緩沖液中浸泡3-5分鐘,。3.按下列過程安裝轉(zhuǎn)移裝置，將塑料支架平放在含轉(zhuǎn)移緩沖液的托盤中,，在塑料支 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：蛋白質(zhì)回收實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：蛋白質(zhì)回收試驗(yàn),，是“對照試驗(yàn)”的一種。當(dāng)所分析的試樣組分復(fù)雜,，不*清楚時,，向試樣中加入已知量的被測組分,，然后進(jìn)行測定，檢查被加入的組分能否定量回收,，以判斷分析過程是否存在系統(tǒng)誤差的方法,。所得結(jié)果常用百分?jǐn)?shù)表示，稱為“百分回收率”,，簡稱“回收率”,。實(shí)驗(yàn)方法基本方案實(shí)驗(yàn)材料蛋白質(zhì)試劑、試劑盒SDSDTT脫色液染色液儀器,、耗材電泳儀透析膜實(shí)驗(yàn)步驟1.凝膠浸泡在染色液中于室溫緩慢搖動染色15~20min,，然后移至脫色液中于4℃溫和搖動下脫色2~3h。2.切下染色后的凝膠條帶,，于4℃水中浸泡2~3h -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶活性測定
谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶是指催化具有親電取代基的外源性化合物與內(nèi)源的還原谷胱甘肽(GSH)反應(yīng)的酶,。可催化多種反應(yīng)包括烴基,、芳基,、芳烴基、烯基和氧基的轉(zhuǎn)移反應(yīng),。谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶是谷胱甘肽結(jié)合反應(yīng)的關(guān)鍵酶,，催化谷胱甘肽結(jié)合反應(yīng)的起始步驟，主要存在于胞液中,。谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶有多種形式,，根據(jù)作用底物不同，至少可分為下列5種：1,、谷胱甘肽S-烷基轉(zhuǎn)移酶：催化烷基鹵化物和硝基烷類化合物的谷胱甘肽結(jié)合反應(yīng),。主要存在于肝臟和腎臟。2,、谷胱甘肽S-芳基轉(zhuǎn)移酶：主要催化含有鹵基或硝基的芳烴類或其它環(huán)狀化合物的谷胱甘
