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很多膜可作為蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移的固相支持物,，如重氮化纖維素膜（DPT,，DBM）,、DEAE-纖維素膜,、尼龍膜等,，但用的zui多的還是硝酸纖維素膜（NC膜）,，該膜與蛋白質(zhì)以非共價的疏水作用形式結(jié)合，結(jié)合能力約為80 μg/cm2,。
實驗方法
- 基本方案
| 實驗材料 | 蛋白質(zhì) |
|---|---|
| 試劑,、試劑盒 | 轉(zhuǎn)移緩沖液 甲醇 電極緩沖液 |
| 儀器、耗材 | 電轉(zhuǎn)移槽 電泳儀 |
| 實驗步驟 | 1. 剪6塊3 MM 濾紙和一塊NC膜,。 2. 將剪好的3 MM 濾紙和NC膜在轉(zhuǎn)移緩沖液中浸泡3-5分鐘,。 3. 按下列過程安裝轉(zhuǎn)移裝置，將塑料支架平放在含轉(zhuǎn)移緩沖液的托盤中,，在塑料支架上放一塊海綿,。 4. 將3塊3MM濾紙對齊放在海綿上，然后依次將NC膜,、凝膠,、及另3塊慮紙和海綿放上,。 5. 用塑料支架夾緊上述各層，放入電轉(zhuǎn)移槽內(nèi),，NC膜一側(cè)向正極,，凝膠一面向負極。 6. 接通電源電壓120 mA,，轉(zhuǎn)移6小時以上或夜,。 7. 轉(zhuǎn)移結(jié)束后，取出塑料支架,，依次取掉各層,，用鉛筆在膜的上沿作好標記,，切下其中一個孔所對應(yīng)膜的一半,，用氨基黑或考馬士亮蘭染色，檢查轉(zhuǎn)移效果,。 8. 將其余的NC膜放在一張干凈的3 MM 濾紙上,，室溫干燥30~60分鐘（可不做）。 |
| 注意事項 | 1. 慮紙及膜的大小不應(yīng)大于待轉(zhuǎn)移膠的大小,，否則在轉(zhuǎn)移過程中會發(fā)生短路,，影響轉(zhuǎn)移效果。 2. 操作中應(yīng)戴手套,，切不可用手直接觸摸,，因手上的汗和分泌物將直接影響到蛋白從膠向膜的轉(zhuǎn)移。 3. 放置NC膜和濾紙時,，每層之間不應(yīng)有氣泡,，否則將影響轉(zhuǎn)移效果。 4. 待轉(zhuǎn)移蛋白分子量決定轉(zhuǎn)移時間,，分子量大,，轉(zhuǎn)移時間長，反之則小,。 5. 干燥雖然可使蛋白質(zhì)更牢固地結(jié)合到膜上,，但也可能加劇蛋白 |
