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蛋白質(zhì)技術(shù)專題：蛋白質(zhì)測(cè)序
一,、概念當(dāng)前,，所謂蛋白質(zhì)測(cè)序，主要指的是蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定,。蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)（Primarystructure）包括組成蛋白質(zhì)的多肽鏈數(shù)目。很多場(chǎng)合多肽和蛋白質(zhì)可以等同使用,。多肽鏈的氨基酸順序,，它是蛋白質(zhì)生物功能的基礎(chǔ),。蛋白質(zhì)氨基酸順序的測(cè)定是蛋白質(zhì)化學(xué)研究的基礎(chǔ)。自從1953年F.Sanger測(cè)定了胰島素的一級(jí)結(jié)構(gòu)以來(lái),，現(xiàn)在已經(jīng)知道約十萬(wàn)個(gè)不同蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),。二、測(cè)定步驟1多肽鏈的拆分,。由多條多肽鏈組成的蛋白質(zhì)分子,，必須先進(jìn)行拆分。幾條多肽鏈借助非共價(jià)鍵連接在一起,，稱為寡聚蛋白質(zhì),，如，血 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：免疫球蛋白提取技術(shù)
免疫球蛋白（ImmunoglobulinIg）的含量代表著機(jī)體體液免疫的水平,，并進(jìn)一步代表著B(niǎo)細(xì)胞的功能,，因此測(cè)定血清Ig含量可以推知機(jī)體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過(guò)高和過(guò)低。隨著免疫學(xué)的發(fā)展和需要,，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為*的手段,。純化的方法很多，有單一法,，但大多數(shù)采用二步法以上相結(jié)合的方法,，特別是以硫酸銨提純?yōu)榛A(chǔ)，再經(jīng)過(guò)層析柱的方法來(lái)提高免疫球蛋白及其各成分的純度zui為常用,。硫酸銨溶液能使蛋白質(zhì)膠體脫水并中和其電荷而使之沉淀下來(lái)（稱為鹽析）,。不同濃度的硫酸銨鹽析蛋 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：蛋白質(zhì)的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
[原理]蛋白質(zhì)在十二烷基硫酸鈉（SDS）和巰基乙醇的作用下，分子中的二硫鍵還原,，氫鍵等打開(kāi),，形成按1.4gSDS/1g蛋白質(zhì)比例的SDS-蛋白質(zhì)多肽復(fù)合物，該復(fù)合物帶負(fù)電,，故可在聚丙烯酰胺凝膠電泳中向正極遷移,，且主要由于凝膠的分子篩作用，遷移速率與蛋白質(zhì)的分子量大小有關(guān),，因此可以濃縮和分離蛋白質(zhì)多肽,。聚丙烯酰凝膠電泳分離蛋白質(zhì)多數(shù)采用一種不連續(xù)的緩沖系統(tǒng)，主要分為較低濃度的成層膠和較高濃度的分離膠,，配制凝膠的緩沖液,，其pH值和離子強(qiáng)度也相應(yīng)不同，故電泳時(shí),，樣品中的SDS-多肽復(fù)合物沿移動(dòng)的界面移 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：蛋白質(zhì)純化膠體過(guò)濾法
不同大小的蛋白質(zhì)分子進(jìn)入膠體過(guò)濾管柱,，可依其分子量差異分離；是一種廣泛應(yīng)用的partition色析法（Pharmacia操作手冊(cè)，GelFiltration）,。儀器設(shè)備：色析管柱（PharmaciaCcolumn,1.6×100cm）,、鐵架、鐵夾及水平儀,；部分收集器（fractioncollector,需準(zhǔn)備干凈試管約100支）,；濃縮用離心機(jī)（低速5,000rpm）；濃縮用離心管Centriprep-30（Amicon4322）請(qǐng)注意其使用方法藥品試劑：膠體SephacrylS-300（Phar -
反相色譜（reversedphascchromatography,RPC）是基于溶質(zhì),、極性流動(dòng)相和非極性固定相表面間的疏水效應(yīng)建立的一種色譜模式,，任何一種有機(jī)分子的結(jié)構(gòu)中都有非極性的疏水部分，這部分越大,，一般保留值越高,，在液相色譜中這是應(yīng)用面zui廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下,，流動(dòng)相多采用酸性的,、低離子強(qiáng)度的水溶液，并加一定比例的能與水互溶的異丙醇,、乙腈或甲醇等有機(jī)改性劑,，大量使用的填料為孔徑在30納米以上的硅膠烷基鍵合相，除此之外,，也有少量高聚物微球,。實(shí)驗(yàn)表明，烷基鏈長(zhǎng)對(duì)
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蛋白質(zhì)技術(shù)專題：蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（Marker）知識(shí)匯總
相關(guān)專題蛋白Marker可分為：一,、未預(yù)染的Marker即寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn),、高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)以及低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn);二、預(yù)染的Marker即單色預(yù)染和多色預(yù)染,。在westernblot過(guò)程中,，分子量Marker就像個(gè)螺絲釘一樣沒(méi)雖然是個(gè)小細(xì)節(jié)，然而就是這樣一個(gè)小細(xì)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著不可忽視的作用,。這個(gè)WesternBlot參照家族的一員的作用主要是用來(lái)指示蛋白條帶所對(duì)應(yīng)的分子量大小,，只有標(biāo)準(zhǔn)量無(wú)誤了，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說(shuō)服力,，除此之外,，蛋白標(biāo)準(zhǔn)還有表示轉(zhuǎn)移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：重組DNA技術(shù)與基因工程（組圖）
重組DNA技術(shù)是現(xiàn)代分子生物技術(shù)發(fā)展中zui重要的成就之一,。即是基因工程（GeneEngineering）的核心技術(shù),。重組DNA技術(shù)（RecombinantDNATechnique）是人類根據(jù)需要選擇目的基因（DNA段）在體外與基因運(yùn)載體重組，轉(zhuǎn)移至另一細(xì)胞或生物體內(nèi),，以達(dá)到改良和創(chuàng)造新的物種和治療人類疾病的目的,。這一技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，關(guān)鍵在于限制酶的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用。一,、限制酶限制性內(nèi)切核酸酶（restrictiveendonucleases）,，又稱限制酶。是特異性地切斷DNA鏈中磷酸二酯鍵的核酸酶 -
蛋白質(zhì)技術(shù)專題：凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質(zhì)
（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質(zhì)（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類,，這類將影響以后的純化，所以純化前均應(yīng)除去,，此過(guò)程稱為“脫鹽”（desalthing）,。脫鹽常用透析法和凝膠過(guò)濾法，這兩種方法各有利弊,。前者的優(yōu)點(diǎn)是透析后析品終體積較小,，但所需時(shí)間較長(zhǎng)，且鹽不易除盡,；凝膠過(guò)濾法則能將鹽除盡,，所需時(shí)間也短，但其凝膠過(guò)濾后樣品體積較大,。所以,，要根據(jù)具體情況選擇使用。前實(shí)驗(yàn)中樣品體積較小,，凝膠達(dá)濾后樣品體積不會(huì)太增加,，所以選用凝膠過(guò)濾法。（二）試劑與器材（1）SephadexG-25,。（2）0.
