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一,、原理AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態(tài)性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增,，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳,，多態(tài)性即以擴增片段的長度不同被檢測出來,。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接,，連接后的粘末端順序和接頭順序就作為以后PCR反應的引物結合位點。實驗中,，根據(jù)需要通過選擇在末端上分別填加了1～3個選擇性核苷的不同引物,，可以達到選擇性擴增的目的。這些選擇性核苷酸使得引物能選擇性地識別具有特異配對順序
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實驗原理聚合酶鏈式反應-單鏈構象多態(tài)（PolymeraseChainReaction-SingleStrandConformationPolymorphism,，PCR-SSCP）技術是在PCR技術基礎上發(fā)展起來的，它是一種簡單,、快速,、經(jīng)濟的用來顯示在PCR反應產(chǎn)物中單堿基突變（點突變）的手段。該方法已被用做癌基因和抑癌基因突變的篩查檢測,，遺傳病的致病基因分析和基因診斷,，基因制圖等領域。在SSCP測定中,，雙鏈DNA（dsDNA）被變性成為單鏈DNA（ssDNA）,，每一條單鏈DNA都基于它們的內部序
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原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進,。此技術是在細胞（爬片,、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增,，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法,。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬林,；二甲苯,；PBS操作方法1.用10%福爾馬林固定組織8~15hr，石蠟包埋,，切片（4μm）,，將切片置于新鮮的二甲苯中處理5min，放入無水乙醇中浸泡5min,，取出,，空氣干燥；2.對于培養(yǎng)細胞,，可直接制備爬片,，也可有PB
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1樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解,。②兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿,，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,，15到30℃孵育2到3分鐘,。4℃下12000rpm離心15分鐘,。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無色水相上層,。RNA全部被分配于水相中,。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中,。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,，混勻后15到30℃孵育
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PCR技術專題：聚合酶鏈式反應（PCR）擴增和擴增產(chǎn)物克隆
PCR（PolymeraseChainReaction，聚合酶鏈反應）是一種選擇性體外擴增DNA或RNA的方法.它包括三個基本步驟：（1）變性（Denature）：目的雙鏈DNA段在94℃下解鏈,；（2）退火（Anneal）:兩種寡核苷酸引物在適當溫度（50℃左右）下與模板上的目的序列通過氫鍵配對,；（3）延伸（Extension）:在TaqDNA聚合酶合成DNA的zui適溫度下，以目的DNA為模板進行合成,。由這三個基本步驟組成一輪循環(huán),，理論上每一輪循環(huán)將使目的DNA擴增一倍，這些經(jīng)合成產(chǎn)生的DNA -
逆轉錄-聚合酶鏈反應（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction,，RT-PCR）的原理是：提取組織或細胞中的總RNA,，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA,。再以cDNA為模板進行PCR擴增,，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數(shù)量級,，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能,。該技術主要用于：分析基因的轉錄產(chǎn)物、獲取目的基因,、合成cDNA探針,、構建RNA轉錄系統(tǒng)。一,、反轉
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一,、實驗目的1.掌握聚合酶鏈式反應的原理,。2.掌握移液槍和PCR儀的基本操作技術。二,、實驗原理PCR技術,，即聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCR）是由美國PECetus公司的KaryMullis在1983年（1993年獲諾貝爾化學獎）建立的,。這項技術可在試管內的經(jīng)數(shù)小時反應就將特定的DNA段擴增數(shù)百萬倍,，這種迅速獲取大量單一核酸片段的技術在分子生物學研究中具有舉足輕重的意義，極大地推動了生命科學的研究進展,。它不僅是DNA分析zui常用的技術,，而且在DNA重組與表達
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摘要：本實驗介紹了脂質體轉染的幾個方法。實驗原理脂質體（LR）試劑是陽離子脂質體DOTMA和DOPE的混合物（1：1）,。它適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,，是目前條件下zui方面的轉染方法之一。轉染率高,，優(yōu)于磷酸鈣法,，比它高5-100倍，能把DNA和RNA轉染到各種細胞,。用LR進行轉染時,，首先需要優(yōu)化轉染條件，應找出該批LR對轉染某一特定細胞適合的用量,、作用時間等，對每批LR都要做,。先要固定一個DNA的量和DNA/LR混合物與細胞相互作用的時間，DNA可從1-5ug和孵育時間6h,，開始,，
