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標簽：細胞質RNA由于RNA的種類來源很多,，因而提取制備方法各異,，一般有苯酚法,，去污劑法和鹽酸胍法,，其中苯酚法實驗室zui常用,。組織勻漿后用苯酚處理離心,，RNA即溶于上層被酚飽和的水相中,，向水相加冷乙醇后，RNA即以白色絮狀沉淀析出,。此法較好除去DNA和蛋白質,，且獲得生物活性的RNA。實驗方法基本方案實驗材料RNA試劑,、試劑盒PBS細胞裂解液SDS蛋白酶K酚氯仿異戊醇無水乙醇儀器,、耗材離心機培養(yǎng)箱實驗步驟1.對于單層培奍細胞（1）每10cm培養(yǎng)皿培養(yǎng)的細胞，用冰冷PBS洗滌3次,。（2）每次1ml
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標簽：NorthernblotNorthernblot是一種通過檢測RNA的表達水平來檢測基因表達的方法,，通過northernblot的方法可以檢測到細胞在生長發(fā)育特定階段或者脅迫或病理環(huán)境下特定基因表達情況。Northernblot首先通過電泳的方法將不同的RNA分子依據(jù)其分子量大小加以區(qū)分,，然后通過與特定基因互補配對的探針雜交來檢測目的片段,。實驗方法Northernblot技術NorthernBlot實驗方法原理Northernblot的基本概述是將RNA樣品通過變性瓊脂糖凝膠電泳進行分離，
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RNA實驗技術：RNA的變性瓊脂糖凝膠電泳實驗原理,、材料和操作步驟
一、實驗目的學習RNA瓊脂糖凝膠電泳的使用技術,。二,、實驗原理RNA可以使用非變性或變性凝膠電泳進行檢測。在非變性電泳中,，可以分離混合物中不同分子量的RNA分子,，凡是無法確定分子量。只有在變性情況下,，RNA分子*伸展,，其泳動率才與分子量成正比。判斷RNA提取物的完整性是進行電泳的主要目的之一,。完整的未降解的RNA制品的電泳圖譜應可清晰看到18srRNA,、28srRNA、5srRNA的三條帶,，且28srRNA的亮度應為18srRNA的兩倍,。三、材料,、試劑及器具1,、材料總RNA提取物。2,、試劑（1）0 -
一、RNAi的分子機制通過生化和遺傳學研究表明,，RNA干擾包括起始階段和效應階段（inititationａndeffectorsteps）,。在起始階段，加入的小分子RNA被切割為21-23核苷酸長的小分子干擾RNA片段（smallinterferingRNAs,siRNAs）。證據(jù)表明,；一個稱為Dicer的酶,，是RNaseIII家族中特異識別雙鏈RNA的一員，它能以一種ATP依賴的方式逐步切割由外源導入或者由轉基因,，病毒感染等各種方式引入的雙鏈RNA,，切割將RNA降解為19-21bp的雙鏈RNA
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一、實驗目的掌握植物總RNA非變性膠電泳的原理和方法,。二,、實驗原理RNA電泳可以在變性及非變性兩種條件下進行。非變性電泳使用1.0%--1.4%的凝膠,，不同的RNA條帶也能分開,，但無法判斷其分子量。只有在*變性的條件下,，RNA的泳動率才與分子量的對數(shù)呈線性關系,。因此要測定RNA分子量時，一定要用變性凝膠,。在需快速檢測所提總RNA樣品完整性時,，配制普通的1%瓊脂糖凝膠即可。三,、實驗材料,、器具及藥品蘑菇的總RNA溶液。電泳儀,，電泳槽,，電子天平，移液器,，槍頭,，微波爐，紫外透射檢測儀等,。瓊脂糖,，1XTA
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一．原理RNA提取技術不僅是分子生物學技術的重要組成部分，也是功能基因組學科研技術的重要基礎,。從RNA水平研究生物體內基因的調控機制,，已成為分子生物學研究的一個重要手段,。對某一生物或組織進行性狀研究,，首先要獲得該性狀基因，從組織細胞中分離完整的RNA對于分子克隆和基因表達分析等實驗是至關重要的,，如Northern印跡及雜交分析,、cDNA合成等實驗的成效在很大程度上取決于RNA的質量。利用提取的RNA人們可以對特定的基因表達進行定量的檢測，從分子水平的了解細胞生命活動的規(guī)律,。通常一個典型的哺乳動物
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近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來,、特異的阻斷體內特定基因表達,誘使細胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型,稱為RNA干擾（RNAinterference,RNAi）.siRNA（smallinterferingRNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子,能夠以序列同源互補的mRNA為靶目標,降解特定的mRNA.RNAi的發(fā)現(xiàn)具有劃時代的意義,它不僅深入揭示了細胞內基因沉默的機制,而且它還是后基因組時代基因功能分析的有力工具,極大地促進了人類揭示生命奧秘的進程.現(xiàn)在越
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完整RNA的提取和純化，是進行RNA方面的研究工作,，如Nothern雜交,、mRNA分離、RT-PCR,、定量PCR,、cDNA合成及體外翻譯等的前提。所有ＲＮＡ的提取過程中都有五個關鍵點,，即１）：樣品細胞或組織的有效破碎,；２），有效地使核蛋白復合體變性,；３）,，對內源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）有效地將ＲＮＡ從ＤＮＡ和蛋白混合物中分離,；5）,，對于多糖含量高的樣品還牽涉到多糖雜質的有效除去。但其中zui關鍵的是抑制ＲＮＡ酶活性,。RNA的提取目前階段主要可采用兩種途徑,，1），提取總核酸,，再用氯化鋰將RNA沉淀
