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一,、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
掌握植物總RNA非變性膠電泳的原理和方法,。
二,、實(shí)驗(yàn)原理
RNA電泳可以在變性及非變性兩種條件下進(jìn)行,。非變性電泳使用1.0%--1.4%的凝膠，不同的RNA條帶也能分開(kāi),，但無(wú)法判斷其分子量,。只有在*變性的條件下，RNA的泳動(dòng)率才與分子量的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系,。因此要測(cè)定RNA分子量時(shí),，一定要用變性凝膠。在需快速檢測(cè)所提總RNA樣品完整性時(shí),，配制普通的1%瓊脂糖凝膠即可,。
三,、實(shí)驗(yàn)材料、器具及藥品
蘑菇的總RNA溶液,。 電泳儀，電泳槽,，電子天平,，移液器，槍頭,，微波爐,，紫外透射檢測(cè)儀等。 瓊脂糖,，1XTAE電泳緩沖液,，0.5μg/ml溴化乙錠（EB）10X載樣緩沖液。
四,、實(shí)驗(yàn)步驟
（1）用1×TAE電泳緩沖液制作瓊脂糖凝膠,，加1×TAE電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠。
（2）在超凈工作臺(tái)上,，用移液器吸取總RNA樣品4μl于封口膜上,。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上再加入5μl 1×TAE電泳緩沖液及1μl 的10X載樣緩沖液，混勻后,，小心加入點(diǎn)樣孔,。
（3）打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，調(diào)節(jié)電壓至100V,，使RNA由負(fù)極向正極電泳,，約30min后將凝膠放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射檢測(cè)儀上觀察RNA電泳結(jié)果,。
RNA的變性瓊脂糖凝膠檢測(cè)
試劑：
（1）MOPS緩沖液（10*）:0.4mol/L 嗎啉代丙烷磺酸（MOPS） （Ph7.0）,，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。
（2）上樣染料：50%甘油,，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚藍(lán),，0.4%二甲苯藍(lán)。
（3）甲醛,。
（4）去離子甲酰胺,。v電泳槽清洗：去污劑洗干凈（一般浸泡）——水沖洗——乙醇干燥——3%H2O2灌滿——室溫放置10分鐘——0.1%DEPC水沖洗。
操作：
（1） 將制膠用具用70%乙醇沖冼一遍,，晾干備用,。
（2） 配制瓊脂糖凝膠。
①稱(chēng)取0.5g瓊脂糖,，置干凈的100ml 錐形瓶中,，加入40ml蒸餾水,，微波爐內(nèi)加熱使瓊脂糖*溶化均勻。
②待膠涼至60--70 ℃,，依次向其中加入9ml 甲醛,、5ml 10X MOPS緩沖液和0.5ul 溴化乙錠，混合均勻,。
③灌制瓊脂糖凝膠,。
（3） 樣品準(zhǔn)備：
① 取 DEPC處理過(guò)的500ul小離心管，依次加入如下試劑： 10x MOPS緩沖液2ul,，甲醛3.5ul,甲酰胺（去離子）10ul,，RNA 樣品 4.5ul,混勻。
② 將離心管置于60℃水浴中保10分鐘,，再置冰上2分鐘,。
③ 向管中加入3ul 上樣染料，混勻,。
（4）上樣,。
（5）電泳：電泳槽內(nèi)加入1XMOPS緩沖液，于7.5V/ml 的電壓下電泳,。
（6）電泳結(jié)束后,，在紫外燈下檢查結(jié)果。
