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一、單糖發(fā)酵試驗(yàn)

(一),、實(shí)驗(yàn)原理

單糖發(fā)酵是將葡萄糖，乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi),，使其zui終濃度為 0.75~1％。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管,，制成單糖發(fā)酵管,，接種細(xì)菌經(jīng)37℃培養(yǎng)18~24小時(shí)，若能分解糖產(chǎn)酸則酚紅指示劑由紅變黃,，若能分解 甲酸有CO2和H2等氣體形成，小倒管內(nèi)則聚集有氣泡,；不分解,，則指示劑不變色。

(二),、實(shí)驗(yàn)材料

1．菌種：大腸桿菌,，傷寒桿菌18~24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2．培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵管,，乳糖發(fā)酵管等,。

(三)實(shí)驗(yàn)方法

1．將傷寒桿菌，大腸桿菌按照液體接種方法分別接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管內(nèi),。

2．置37℃孵箱培養(yǎng)18~24小時(shí),。

3． 觀察結(jié)果：由于一些細(xì)菌能分解某種糖類產(chǎn)酸，所以培養(yǎng)基中PH下降到7.0以下,，在酚紅指示劑的顯示下,，培養(yǎng)基顏色由紅變黃。產(chǎn)酸者以“+”表示,，如果同 時(shí)產(chǎn)生氣體,，則培養(yǎng)基中小倒管內(nèi)有氣泡出現(xiàn),，此乃產(chǎn)酸又產(chǎn)氣,，以“⊕”表示，不分解,，則指示劑不變色,，用“-” 表示。

(四),、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

傷寒桿菌 大腸桿菌

葡萄糖 + ⊕

乳 糖 - ⊕

二,、V-P(Voges-Proskauer)試驗(yàn)

(一),、實(shí)驗(yàn)原理

有些細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,，丙酮酸脫羧,，生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中被氧化為二乙酰,，再與培養(yǎng)基內(nèi)胍基結(jié)合,，生成紅色化合物，V—P試驗(yàn)陽性,。

(二),、實(shí)驗(yàn)材料

1．菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌18~24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物,。

2．培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基,。

3．試劑：V-P試劑[40％氫氧化鉀水溶液(內(nèi)含0.3％肌酸)和6%α-奈酚酒精溶液]。

(三)實(shí)驗(yàn)方法

1. 分別接種大腸桿菌,，產(chǎn)氣桿菌于兩支葡萄糖蛋白胨水中,。

2. 置37℃培養(yǎng)48小時(shí)后，取出分別加入KOH1ml和α-奈酚溶液1ml ,搖勻,，靜置試管架上5~15分鐘,。

(四)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

培養(yǎng)液變?yōu)榧t色為陽性,，不變色為陰性,。

三、甲基紅試驗(yàn)

(一),、實(shí)驗(yàn)原理

某 些細(xì)菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,，繼而分解為甲酸、乙酸,、乳酸等,，使培養(yǎng)基PH值降至4.5以下，加入甲基紅指示劑呈紅色,，此為陽性反應(yīng),；若產(chǎn)酸 量少或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為醇、醛,、氣體和水等,，則培養(yǎng)基的酸堿度仍在PH 6.2以上，加入甲基紅指示劑呈現(xiàn)黃色,，為陰性反應(yīng),。

(二)、實(shí)驗(yàn)材料

1. 菌種：大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌18~24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物,。

2. 培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基,。

3. 試劑：甲基紅試劑。

(三)實(shí)驗(yàn)方法

1. 分別將大腸桿菌,，產(chǎn)氣桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中。

2. 置37℃培養(yǎng)2~3天取出,，分別滴加甲基紅試劑2~3滴,，混勻，觀察結(jié)果,。

(四),、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

大腸桿菌：+，產(chǎn)氣桿菌：-,。

四,、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)

(一)、實(shí)驗(yàn)原理

枸 櫞酸鹽培養(yǎng)基系一綜合性培養(yǎng)基,，其中枸櫞酸鈉為*碳源,，磷酸二氫銨為*氮源。一般細(xì)菌能利用磷酸二氫銨作為氮源,，但不一定能分解枸櫞酸鹽取得碳源,。因 此，根據(jù)可否利用枸櫞酸鹽來鑒別細(xì)菌,，如產(chǎn)氣桿菌可利用枸櫞鹽作為碳源,，細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖，形成菌苔,，分解枸櫞酸鹽生成堿性碳酸鹽,，使培養(yǎng)基PH上升到7.0 以上，由綠色變?yōu)樯钐m色,，為枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陽性,；而大腸桿菌則不能分解枸櫞酸鹽，得不到碳源,，不能生長(zhǎng),，無菌苔形成，培養(yǎng)基顏色不發(fā)生變化,，為枸櫞酸鹽 利用試驗(yàn)陰性,。

(二)、實(shí)驗(yàn)材料

1. 菌種：大腸桿菌,，產(chǎn)氣桿菌18~24小時(shí)瓊脂斜面培養(yǎng)物,。

2. 培養(yǎng)基：枸櫞酸鹽斜面。

(三)實(shí)驗(yàn)方法

1. 分別將大腸桿菌，產(chǎn)氣桿菌接種于兩支枸櫞酸鹽斜面培養(yǎng)基,。

2. 置37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)后觀察結(jié)果,。

(四)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

產(chǎn)氣桿菌：+（有菌苔生長(zhǎng),，培養(yǎng)基變色）

大腸桿菌：-（無菌苔生長(zhǎng),，培養(yǎng)基不變色）