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細(xì)胞技術(shù)專題：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)可以：（1）用于細(xì)胞保種,；（2）用于分子生物學(xué)研究,；（3）用于基因治療研究,。實(shí)驗(yàn)方法腹腔取材法實(shí)驗(yàn)方法原理巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞,，有多種功能,，是研究細(xì)胞吞噬,、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象,。巨噬細(xì)胞容易獲得,，便于培養(yǎng)，并可進(jìn)行純化,。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì)胞群,，在條件適宜下可生活2－3周，多用做原代培養(yǎng),，難以長(zhǎng)期生存,。巨噬細(xì)胞也建有無(wú)限細(xì)胞系，大多來(lái)自小鼠,，如P331,、S774A.1、RAW309Cr.l等,，均獲惡性,，培養(yǎng)中呈巨噬細(xì)胞形態(tài)和吞噬功能，易 -
正常培養(yǎng)的細(xì)胞自噬活性很低,，不適于觀察,，因此,，必須對(duì)自噬進(jìn)行人工干預(yù)和調(diào)節(jié)，經(jīng)報(bào)道的工具藥有：一,、自噬誘導(dǎo)劑(1)BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin：模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(2)Carbamazepine/L-690,，330/LithiumChloride（氯化鋰）：IMPase抑制劑（即Inositolmonophosphatase，肌醇單磷酸酶）(3)Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓(4)N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：C
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細(xì)胞技術(shù)專題：細(xì)胞計(jì)數(shù)及活力測(cè)定實(shí)驗(yàn)
一,、原理培養(yǎng)的細(xì)胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長(zhǎng)良好,，所以要進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)結(jié)果以每毫升細(xì)胞數(shù)表示,。細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理和方法與血細(xì)胞計(jì)數(shù)相同,。在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞，總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力,，由組織中分離細(xì)胞一般也要檢查活力,，以了解分離的過(guò)程對(duì)細(xì)胞是否有損傷作用。復(fù)蘇后的細(xì)胞也要檢查活力,，了解凍存和復(fù)蘇的效果,。用臺(tái)盼蘭染細(xì)胞，死細(xì)胞著色,，活細(xì)胞不著色,，從而可以區(qū)分死細(xì)胞與活細(xì)胞。利用細(xì)胞內(nèi)某些酶與特定的試劑發(fā)生顯色反應(yīng),，也可測(cè)定細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力,。二、儀器 -
細(xì)胞技術(shù)專題：新生大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：新生大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)可以：（1）細(xì)胞保種,；（2）用于細(xì)胞形態(tài)研究,；（3）應(yīng)用于臨床研究。實(shí)驗(yàn)方法胰酶消化法實(shí)驗(yàn)方法原理將大鼠的心肌細(xì)胞從機(jī)體中取出,，經(jīng)胰酶,、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細(xì)胞,，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖,。實(shí)驗(yàn)材料SD乳鼠試劑,、試劑盒低糖DMEM、胰酶EDTA青鏈霉素碳酸氫鈉液新生牛血清谷氨酰胺D-Hank's液新潔爾滅碘酒酒精儀器,、耗材鋁盒眼科直剪眼科彎剪眼科直鑷眼科彎剪玻璃培養(yǎng)皿廣口瓶棉球燒杯錐形瓶離心管磁力攪拌器攪 -
細(xì)胞技術(shù)專題：PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路
目的：通過(guò)特異性阻斷PI3K和mTOR,，觀察HepG2和Hep3B細(xì)胞株P(guān)I3K/Akt/mTOR信號(hào)通路活性及生物學(xué)行為的改變，探討相關(guān)的分子機(jī)制,。方法：在培養(yǎng)的HepG2,、Hep3B人肝癌細(xì)胞株和人正常肝細(xì)胞株QSG-7701上,，以免疫印跡方法（Westernblot）檢測(cè)各細(xì)胞株中PI3K（p110α亞單位）、PTEN,、pAkt（S473,，T308）和p-mTOR（S2448）的表達(dá)情況；分別用PI3K抑制劑LY294002（50μmol/ml）和mTOR抑制劑Rapamycin（RAPA -
細(xì)胞技術(shù)專題：細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：細(xì)胞原代培養(yǎng)細(xì)胞原代培養(yǎng)可以：（1）為研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng),、代謝,、繁殖提供有力的手段；（2）為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件,；（3）服務(wù)于臨床實(shí)踐,，用于藥物篩選等。實(shí)驗(yàn)方法胰酶消化法組織塊直接培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)方法原理將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出,，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）,、螯合劑（常用EDTA）或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞,，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖,，這一過(guò)程稱原代培養(yǎng),。因此，較為嚴(yán)格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養(yǎng),，此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),，如果是正常細(xì)胞，仍然保留二倍體數(shù),。但實(shí)際 -
細(xì)胞技術(shù)專題：小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽：小鼠胚胎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)原代培養(yǎng)可以：（1）用于細(xì)胞保種；（2）用于分子生物學(xué)研究,；（3）用于基因治療相關(guān)研究,。實(shí)驗(yàn)方法胰酶消化法1胰酶消化法2實(shí)驗(yàn)方法原理將小鼠的胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）從機(jī)體中取出，經(jīng)胰酶,、螯合劑（常用EDTA）處理,，分散成單細(xì)胞，置MEF生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng),，使細(xì)胞得以生存,、生長(zhǎng)和繁殖。實(shí)驗(yàn)材料孕鼠試劑,、試劑盒PBSEDTA胰酶MEF生長(zhǎng)培養(yǎng)基FBS高糖DMEM儀器,、耗材眼科直剪眼科直鑷眼科彎鑷玻璃平皿3尼龍濾網(wǎng)離心管手術(shù)刀片實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)材料 -
細(xì)胞技術(shù)專題：流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡：PI單染色法
一,、基本原理其原理主要是根據(jù)細(xì)胞凋亡時(shí)在細(xì)胞,、亞細(xì)胞和分子水平上所發(fā)生的特征性改變,。這些改變包括細(xì)胞核的改變、細(xì)胞器的改變,、細(xì)胞膜成分的改變和細(xì)胞形態(tài)的改變等,，其中細(xì)胞核的改變特征性，主要包括以下幾個(gè)方面：1,、細(xì)胞核的改變由于凋亡細(xì)胞核的改變,，造成各種染色體熒光染料對(duì)凋亡細(xì)胞DNA可染性發(fā)生改變。研究表明,，用各種染色體熒光染料對(duì)經(jīng)固定的凋亡細(xì)胞進(jìn)行染色,，其DNA可染性降低。許多學(xué)者把這種DNA可染性的降低認(rèn)為是凋亡細(xì)胞的標(biāo)志之一,。2,、光散射特性凋亡細(xì)胞形態(tài)上的改變影響它們的光散射特性。在流式細(xì)胞
