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  • 細(xì)胞技術(shù)專(zhuān)題:體外細(xì)胞的原代培養(yǎng),、傳代培養(yǎng),、凍存和復(fù)蘇

    一,、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng),。直接從體內(nèi)獲取的組織細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)為原代培養(yǎng),;當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后,,則需要做再培養(yǎng),,即將培養(yǎng)的細(xì)胞分散后,從一個(gè)容器以1:2或其他比率轉(zhuǎn)移到另一個(gè)或幾個(gè)容器中擴(kuò)大培養(yǎng),,為傳代培養(yǎng),,傳代培養(yǎng)的累積次數(shù)就是細(xì)胞的代數(shù)。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力,。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或DMSO作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少
  • 細(xì)胞技術(shù)專(zhuān)題:細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

    一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,、掌屋凋亡細(xì)胞的形態(tài)特征2,、學(xué)會(huì)用熒光探針對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雙標(biāo)記來(lái)檢測(cè)正常活細(xì)胞,、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的方法二,、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學(xué)意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類(lèi)型,。凋亡普遍存在于生命界,,在生物個(gè)體和生存中起著非常重要的作用。它是細(xì)胞在一定生理?xiàng)l件下一系列順序發(fā)生事件的組合,是細(xì)胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過(guò)程,。細(xì)胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征,。在形態(tài)上可見(jiàn)凋亡細(xì)胞與周?chē)?xì)胞脫離接觸,細(xì)胞變園,,細(xì)胞膜向內(nèi)皺縮,、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張,、細(xì)胞核固縮破裂呈團(tuán)塊狀
  • 生物化學(xué)技術(shù)專(zhuān)題:對(duì)乙酰氨基酚片溶出度測(cè)定

    一,、試驗(yàn)?zāi)康?.掌握片劑溶出度的測(cè)定方法2.能正確使用溶出度測(cè)定儀二、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)片劑等固體制劑服用后,,在胃腸道中要先經(jīng)過(guò)崩解和溶出兩個(gè)過(guò)程,,然后才能透過(guò)生物膜吸收。對(duì)于許多藥物來(lái)說(shuō),,其吸收量通常與該藥物從劑型中溶出的量成正比,。對(duì)難溶性藥物而言,溶出是其主要過(guò)程,,故崩解時(shí)限往往不能作為判斷難溶性藥物制劑吸收程度的指標(biāo),。溶解度小于0.1~1.0(g/L)的藥物,體內(nèi)吸收常受其溶出速度的影響,。溶出速度除與藥物的晶型,、顆粒大小有關(guān)外,還與制劑的生產(chǎn)工藝,、輔料,、貯存條件等有關(guān)。為了有效地控制固體制劑質(zhì)量,,除
  • 生物化學(xué)技術(shù)專(zhuān)題:鞣質(zhì)類(lèi)化合物的鑒別

    1.檢品溶液的制備:取五倍子(含可水解鞣質(zhì)),,兒茶(含縮合鞣質(zhì)),沒(méi)食子酸(鞣質(zhì)水解產(chǎn)生偽鞣質(zhì))少量(約0.1克)分別置大試管中,,加蒸餾水約10ml,,加熱煮沸,過(guò)濾,,濾液作以下試驗(yàn):2.鞣質(zhì)的一般反應(yīng)(鞣質(zhì)與偽鞣技的區(qū)別鑒定)(1)感觀試驗(yàn):取制備的鞣質(zhì)和偽鞣質(zhì)溶液,,嘗其味,并以石蕊試紙檢查溶液是否呈酸性反應(yīng),。(2)三氯化鐵反應(yīng):取制備的鞣質(zhì)溶液(五倍子溶液或兒茶溶液)及偽鞣溶液(食子酸溶液)各1~2ml,,分別加入三氯化鐵試液,鞣質(zhì)產(chǎn)生綠色或蘭黑色反應(yīng)或沉淀;偽鞣質(zhì)產(chǎn)生蘭色反應(yīng)。(3)沉淀蛋白反
  • 生物化學(xué)技術(shù)專(zhuān)題:揮發(fā)油的定性鑒別

    1.外觀性狀:(1)取各種揮發(fā)油(松節(jié)油,、薄荷油,、丁香油,、陳皮油及桂皮油)觀察其色澤,是否有特殊香氣,,及辛辣燒灼味感,。(2)揮發(fā)性:取濾紙屑一小塊,滴加薄荷油一滴,,放置2小時(shí)或微熱后觀察濾紙上有無(wú)清晰的油跡(與菜油作對(duì)照實(shí)驗(yàn)),。(3)pH檢查:(檢游離酸或酚類(lèi))。取樣品一滴加乙醇5滴,,以預(yù)先用蒸餾水濕潤(rùn)的廣泛pH試紙進(jìn)行檢查,,如顯酸性,示有游離的酸或酚類(lèi)化合物,,剩下的樣品乙醇液供下面(7)(8)試驗(yàn)用,。(4)FeCl3反應(yīng)(檢酚類(lèi)):取樣品一滴,溶于1ml乙醇中,,加入1%得FeCL3醇液1~2滴
  • 生物化學(xué)技術(shù)專(zhuān)題:皂苷的鑒別

    1.檢品溶液的制備:1)取皂角碎塊1g于大試管(或小燒杯)中,,加蒸餾水15ml,于30~90°水浴上浸漬15分鐘后過(guò)濾,,濾液供鑒別用,。2)取薯蕷碎塊0.5g加上法同樣制備得薯蕷水浸液。3)取薯蕷碎塊0.5g于大試管或小錐形瓶中加95%乙醇10ml于水浴上溫浸15分鐘,,濾液供鑒別。2.鑒別試驗(yàn):(1)溶血試驗(yàn):取濾紙片一小塊,,于小心處滴加皂角浸液一滴,,待干后于同處再滴加一滴,如是反復(fù)操作至滴加數(shù)滴,,干燥后無(wú)噴霧血球試液(取牛血,、羊血或兔血一份,用玻棒或棉簽攪和,,除去凝集的血蛋白,,加pH7.4磷酸鹽
  • 生物化學(xué)技術(shù)專(zhuān)題:強(qiáng)心苷的鑒別

    1.檢品溶液的制備:取夾竹桃葉碎塊粉末3g,于100ml錐形瓶中加70%乙醇40ml,,水浴上浸煮5分鐘,,放冷,過(guò)濾,,濾液(或經(jīng)處理后--方法參照注二)供鑒別用,。[注1]:強(qiáng)心苷的試驗(yàn)都是在較強(qiáng)的堿性條件下進(jìn)行,如果樣品中含有蒽醌,,也具有紅色反應(yīng),,防礙檢查,因此在檢查前需先檢查有無(wú)蒽醌類(lèi)成分,若有則應(yīng)先將其除去,,即將乙醇浸液在水浴上蒸發(fā),,殘?jiān)覥HCl3熱溶后過(guò)濾,CHCl3液用1%NaOH液振搖,,去除蒽醌后,,CHCl3液供鑒別用。[注2]:夾竹桃葉或毛地黃葉綠素,,常使醇提液帶較深的綠色,,影響反應(yīng)
  • 生物化學(xué)技術(shù)專(zhuān)題:蒽苷的鑒別

    1.檢品溶液的制備:取大黃粉末2克,加乙醇20ml,,在沸水浴上回流浸提10分鐘,,過(guò)濾供鑒別用。2.鑒別試驗(yàn):(1)與堿成鹽顯色反應(yīng)(Borntrager反應(yīng)):取1ml乙醇提取液,,加入1ml10%NaOH溶液,,如產(chǎn)生紅色反應(yīng),加入少量30%過(guò)氧化氫液,,加熱后紅色不褪,,加酸使呈酸性時(shí),則紅色消褪再堿化又出現(xiàn)紅色,。注:或取大黃粉末少許,,置小試管中,加水1~2ml,,加濃H2SO42-3滴,,置水浴中加熱10分鐘,冷卻,,加乙1-2ml振搖,。用吸管吸取醚液(黃色)于另一潔凈試管中,加入NaOH試液1ml振搖
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