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實驗原理
血紅蛋白電泳（hemoglobin electrophoresis）目的是檢出和確認各種正常和異常的血紅蛋白。
根據(jù)不同的血紅蛋白帶有不同的電荷，等電點不同,，在一定的pH緩沖液中，血紅蛋白的等電點小于緩沖液的pH時帶負電荷，電泳時在電場中向陽極泳動，反之,，Hb帶正電荷向陰極泳動。在一定電壓下,，經(jīng)過一定時間的電泳,，不同的血紅蛋白所帶電荷不同，分子量不同,，其泳動方向和速度不同,，可分離出各自的區(qū)帶，同時對電泳出的各區(qū)帶進行比色或電泳掃描,，可進行各種血紅蛋白的定量分析,。一般zui常用的是pH8.6醋酸纖維薄膜電泳。
胞漿內(nèi)存在糖原或多糖類物質(zhì)（如粘多糖,、粘蛋白,、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）經(jīng)過碘酸（periodicacid）氧化,，轉(zhuǎn)變?yōu)槎┗–HO-CHO）,，與雪夫（Schiff ）試劑中的無色品紅結(jié)合,，形成紫紅色染料而沉積于細胞內(nèi)多糖所在處。該反應(yīng)稱為過碘酸-雪夫（PAS）陽性反應(yīng),，以前也稱為糖原染色,。
實驗方法
材料：
1. 緩沖液
（1）pH8.6 TEB緩沖液：稱取Tris10.29 g，EDTA 0.6 g,，硼酸3.2 g,，加蒸餾水至1000 ml。
（2）硼酸鹽緩沖液：稱取硼砂6.87 g,，硼酸5.56 g,，加蒸餾水至1000 ml。
2. 醋酸纖維薄膜,、電泳儀、加樣器,、分光光度計,、比色杯。
方法：
1. 血紅蛋白溶液的制備
取肝素或者枸櫞酸鈉抗凝血3 ml,，2000 rpm離心10分鐘后棄去血漿,；用生理鹽水洗滌紅細胞三次（750 rpm，離心5分鐘）,，再2200rpm,，離心10分鐘，棄去上清液,；加入等量的蒸餾水,；再加入0.5倍體積四化碳，用力振搖5分鐘,，2200 rpm,，離心10分鐘后將上層Hb液吸出備用。
2. 浸膜
將醋酸纖維薄膜剪成3 cm×8 cm的紙條,，浸入pH8.6 TEB緩沖液,，浸透后取出，用濾紙吸干,。
3. 點樣
用加樣器取血紅蛋白液10 μl,，然后垂直點樣到醋酸纖維膜上（毛面），距邊緣1.5 cm處,。
4. 電泳
將硼酸鹽緩沖液作為電泳緩沖液倒入電泳槽中,，將點樣后的醋酸纖維膜放于電泳槽架上，點樣在陰,，200 V,，30分鐘,。
5. 洗脫
分別剪下HbA、HbA2,，放入試管內(nèi),，分別加入蒸餾水15 ml和3 ml，輕輕振蕩,，待血紅蛋白*洗脫后,，混勻。
6. 比色
洗脫液用蒸餾水空白調(diào)零,，415 nm測定吸光度,。
7. 計算
HbA2（%）=HbA2管吸光度/（HbA管吸光度×5+ HbA2管吸光度）×100%
實驗結(jié)果計算
pH8.6 TEB緩沖液醋酸纖維電泳參考范圍：HbA>95%，HbA2 1%-3.1%
注意事項
1. 電泳時間不能太長,電泳時醋纖膜不能變干,故應(yīng)觀察到HbA和HbA2清晰分開就停止電泳,電泳時間太長區(qū)帶反而擴散模糊,；
2. 點樣量不能太多,如血紅蛋白液太多,，色帶易脫落或染色不透，可出現(xiàn)HbA相對增高的假陽性結(jié)果,；
3. 避免醋酸纖維膜被蛋白質(zhì)污染,；
4．電流不應(yīng)過大，否則血紅蛋白分不開帶,；
5．應(yīng)同時做正常人和必要的已知異常血紅蛋白的標本對照,。
