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巢式PCR
標(biāo)簽： 巢式 PCR
巢式PCR是一種變異的聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）,，使用兩對（而非一對）PCR引物擴增完整的片段,。*對PCR引物擴增片段和普通PCR相似,。第二對引物稱為巢式引物（因為他們在*次PCR擴增片段的內(nèi)部）結(jié)合在*次PCR產(chǎn)物內(nèi)部,，使得第二次PCR擴增片段短于*次擴增,。
實驗方法
- 基本方案
| 實驗方法原理 | 由于巢式PCR反應(yīng)有兩次PCR擴增,，從而降低了擴增多個靶位點的可能性（因為與兩套引物都互補的引物很少）增加了檢測的敏感性；又有兩對PCR引物與檢測模板的配對,，增加了檢測的可靠性,。 由于第二套引物位于*輪PCR產(chǎn)物內(nèi)部，而非目的片斷包含兩套引物結(jié)合位點的可能性極小,，因此第二套引物不可能擴增非目的片斷,。這種巢式PCR擴增確保第二輪PCR產(chǎn)物幾乎或者*沒有引物配對特異性不強造成的非特異性擴增的污染。
巢式PCR反應(yīng)模式圖 |
|---|---|
| 實驗材料 | 基因樣品 |
| 試劑,、試劑盒 | PCR緩沖液 Tris·HCl KCl Taq聚合酶 |
| 儀器,、耗材 | PCR儀 |
| 實驗步驟 | 1. 目標(biāo)的DNA模板藍色的*對引物結(jié)合。*對引物也可能結(jié)合到其他具有相似結(jié)合位點的片段上并擴增多種產(chǎn)物,。但只有一種產(chǎn)物是目的片斷（圖中未顯示可能的多種產(chǎn)物）,。
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| 注意事項 | 1. 引物設(shè)計原則：每個特異性引物為24~26個堿基，Tm：64-65%,，GC：44-55% ,。這樣你可以同時做多個不同的TAIL PCR。
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| 其他 | 1. 圖解
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