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菌落PCR
標(biāo)簽： 菌落 PCR
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因組DNA,，不必酶切鑒定，而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,，省時(shí)少力,。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進(jìn)行重組體的篩選或者DNA測(cè)序分析,。zui后的PCR產(chǎn)物大小是載體通用引物之間的插入片斷大小,。
實(shí)驗(yàn)方法
- 基本方案
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 直接挑取菌落進(jìn)行PCR，PCR的95℃加熱可以破胞,，釋放基因組DNA或質(zhì)粒,，成為PCR體系的模板，然后進(jìn)行鏈?zhǔn)綌U(kuò)增,。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 基因樣品 |
| 試劑,、試劑盒 | dNTP PCR混合液 |
| 儀器、耗材 | PCR儀 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 1. PCR混合液的制備
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| 注意事項(xiàng) | 1. 設(shè)計(jì)引物很關(guān)鍵,。一般如果是定向克隆,，用載體上的通用引物即可；如pET系列可用T7通用引物,。如果是非定向克?。ㄈ鐔蚊盖谢蚱侥┒诉B接），一條引物用載體,，一條引物用目的基因上的,，這樣就可以比較方便的鑒定了，而且錯(cuò)誤概率很低,。PCR條件的選擇接近*,，同時(shí)挑取的菌體不宜太多，否則會(huì)有非特異性擴(kuò)增,。
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